毛尖紫萼藓抗坏血酸过氧化物酶等3条基因的表达载体构建及复水cDNA文库的构建

来源 :齐齐哈尔大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:hdiell
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干旱胁迫时影响植物生长发育的主要环境因素,水分的缺乏会导致植物的生长受到抑制甚至死亡,研究耐旱植物的作用机制以及抗旱基因的应用已成为热点。本文以紫萼藓科毛尖紫萼藓为实验材料,对毛尖紫萼藓的三条抗旱相关的基因进行了分析,对干旱后复水12h的毛尖紫萼藓进行了cDNA文库的构建。(1)以毛尖紫萼藓干旱材料总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增得到抗坏血酸过氧化物酶基因(GpAPX)、半胱氨酸过氧化物酶基因(GpPER)和泛素类似蛋白基因(GpUBP);并构建了重组表达载体pRI101-GpAPX、pRI101-GpPER和pRI101-GpUBP;利用农杆菌介导法将植物表达载体转入到烟草基因组中;(2)对毛尖紫萼藓GpUBP基因进行了生物信息学分析和表达分析;(3)对毛尖紫萼藓不同复水时间下,游离脯氨酸含量的变化进行了测定,结果显示复水12h游离脯氨酸的含量最高。(4)以复水12h的毛尖紫萼藓为实验材料,采用SMART技术构建了毛尖紫萼藓复水cDNA文库,文库滴度3.78×106pfu/mL,菌落PCR检测,插入片段分布在500-2500bp之间,平均大小为约为700bp左右,重组率约为93.7%。1001个单克隆测序成功,高质量的序列971个,获得432条Unigene,其中包含96个Contig和336个Singlets。通过GO分类分析可将Unigene分为18类,细胞占13.86%、胞外区占0.37%、细胞器占10.41%、蛋白复合体占9.41%、抗氧化活性占0.87%、结合占9.9%、催化活性占9.16%、酶调节活性占0.12%、信号传导活性占0.24%、结构分子活性占7.92%、转录调节占0.37%、翻译调节占、转运调节占1.86%、运动活性占0.12%、细胞进程占15.22%、生理学进程占18.07%、生物学途径调控占0.99%、应激响应占0.99%。(5)毛尖紫萼藓cDNA文库中包含有与植物抗旱相关的基因,这些基因与毛尖紫萼藓能在极端耐旱的条件下仍然保持生物学活性密切相关,为进一步研究毛尖紫萼藓生长发育的分子机理奠定了基础,也为利用抗旱基因资源提供了分子生物学的基础。
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