巴尔喀什黑伞8种胞外酶活力变化规律研究

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巴尔喀什黑伞(Agaricus balchaschensis Samgina&G.A.Nam)隶属于蘑菇科,蘑菇属,是新疆独有的野生食药用真菌。由于野生巴尔喀什黑伞的生境受到严重的破坏,野生资源已不能满足人们的需求量,因此对巴尔喀什黑伞营养代谢能力的研究及人工驯化栽培更显紧迫。本研究以新疆博斯腾湖沿岸的巴尔喀什黑伞为研究对象,首先探究不同培养基对菌种活力复壮的影响,进一步从酶学的角度出发探究巴尔喀什黑伞对大分子营养物质的降解利用情况,旨在为生产上提高巴尔喀什黑伞生物学效率以及充分挖掘其内在利用潜力的栽培方法提供依据。主要研究结果如下:(1)通过2种不同培养基对低温保藏的巴尔喀什黑伞菌种活力恢复影响的研究发现,菌丝体在PDA加富培养基中的最大日生长量与生长速率均明显优于普通PDA培养基,最大生长量及生长速率比PDA普通培养基分别高出15.7%和23.1%。(2)在供试的2种棉籽壳培养基中,通过对比得出未添加木屑的棉籽壳培养基配方更适合巴尔喀什黑伞菌丝体生长,菌丝体在未添加木屑的棉籽壳培养基配方中,最大日生长量以及生长速率分别高出对照棉籽壳培养基21.4%和14.1%。(3)通过对比6种不同配比的麦粒混合培养基内菌丝生长势发现,在营养配方为黑麦、碳酸钙、氧化钙、石膏的混合培养基内,日均生长速率达6.66 mm/d,极显著高于其它处理;在以小麦、碳酸钙、石膏培养基中总生长量最大,菌丝总生长量达60.37 mm;在混合有黑麦的麦粒配方内,菌丝体洁白,浓密,长势均优于未添加黑麦的培养基配方。(4)在经紫外光照射0~8 min内的巴尔喀什黑伞菌丝体均可生长,紫外光照射2~6 min内的菌丝体总生长量呈现递增趋势,其中紫外光照射时长达6 min时,菌丝体总生长量达74.37 mm,极显著高于照射2 min的菌丝体总生长量;紫外光照射4 min及6 min的菌丝体满皿时间一致,且生长势均达到最佳。(5)巴尔喀什黑伞在以羧甲基纤维素为固定碳源的培养条件下,滤纸酶活力峰值为0.238 U,且出现时间最早;其次出现活力峰值的是羧甲基纤维素酶,为0.406 U,最后是β-葡萄糖苷酶,为1.233 U。滤纸酶与羧甲基纤维素酶峰值出现时间差异较小,活力峰值较均值分别高出30.64%,34.88%。β-葡萄糖苷酶活力呈递增趋势,且峰值较活力均值高出33.19%,证明了巴尔喀什黑伞对纤维素有一定降解能力。(6)通过设置不同碳源测定5种胞外酶活力,胞外酶活力峰值出现时间不一致,并呈现一定的规律。果胶酶、漆酶活力分别为0.783 U及3.611 U,在培养周期内最先达到峰值,且活力峰值比均值高出29.4%,64.2%。之后依次是木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶,活力峰值分别为1.553 U、1.065 U、4.704 U,并且较活力均值分别高出40.23%、44.3%、41.75%。证明巴尔喀什黑伞对营养利用能力强弱不同,且存在一定的顺序性,木质素与果胶先于纤维素、淀粉、半纤维素等碳源被菌丝体利用。(7)通过不同碳源对纤维素酶诱导,结果表明在设置的3种碳源中,羧甲基纤维素酶活力最大值出现在以乳糖诱导的培养基中,为2.837 U。按羧甲基纤维素酶活力最大值所对应的底物依次为:乳糖>纤维二糖>羧甲基纤维素;滤纸酶活力最大值为1.397 U,最大值对应底物次序与羧甲基纤维素酶诱导条件下保持一致;β-葡萄糖苷酶活力最大值为0.431 U,其活力最大值对应底物依次为:纤维二糖>羧甲基纤维素>乳糖诱导峰值出现在纤维二糖诱导的培养基中。在3种不同碳源的诱导下,各纤维素酶活力水平具有显著性差异,证明了纤维素酶属于诱导酶。
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