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目的：AML1是急性白血病中较常见的一种易位靶基因，除常见的t(8;21)即AML1-ETO融合方式外尚存在许多未知融合类型，发现并研究新的融合蛋白生物学功能对白血病诊断治疗具有十分重要的意义。前期研究中，我们通过自主设计的方法筛选并鉴定得到一例新的融合类型t(1;21)(p32;q22)即AML1-PRP38A。本研究中我们将通过构建慢病毒表达系统研究其对U937细胞增殖和分化的影响，明确AML1-PRP38A在白血病发生中的作用。此研究将有助于进一步揭示AML1基因相关白血病的发生机制，为开发具有我国自主知识产权的靶向药物、实现个体化治疗奠定理论基础。方法：1.构建AML1-PRP38A及对照载体的慢病毒表达体系扩增AML1-PRP38A的全长CDS编码区域，分别通过酶切反应、连接反应和转化，构建慢病毒表达载体pCDH-AML1-PRP38A。将构建成功的真核表达质粒和空质粒分别与包装质粒pPACKH1-GAG，pVSV-G和pPACKH1-REV按一定比例混合，通过脂质体法转染293T细胞，包装慢病毒颗粒，用激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测转染效率。2.慢病毒感染U937细胞，筛选出稳定的细胞克隆收集慢病毒上清，感染U937细胞，采用流式细胞术筛选GFP阳性细胞，Western bolt检测稳定细胞克隆中目的基因的表达。将构建好的稳定细胞克隆分别命名为U937-AML1-PRP38A和U937-pCDH-EGFP（空载体）。3. AML1-PRP38A在造血细胞增殖分化中的作用。对上述稳定克隆细胞进行细胞增殖检测和细胞分化检测，研究AML1-PRP38A融合蛋白对细胞增殖，分化的影响。结果：1.成功构建了AML1-PRP38慢病毒表达载体，并包装出慢病毒颗粒。2.通过慢病毒感染U937细胞，获得稳定表达目的基因的稳定细胞株。3.通过对稳定细胞株在增殖，分化方面的检测，证实AML1-PRP38A在白血病细胞中促进细胞增殖，抑制细胞分化。结论：AML1-PRP38A在白血病细胞中促进细胞增殖，抑制细胞分化，可能是诱发血病发生的重要癌基因。目的：研究2例新型e13a3慢性粒细胞白血病（CML）患者BCR/ABL融合基因的DNA断裂位点，确定其产生机制。方法:采用特异引物进行巢氏聚合酶链反应(nested-PCR)扩增DNA片段，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳纯化后进行测序分析。结果：前期逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）产物经序列分析发现，患者1为BCR第13外显子和ABL第3外显子之间插入819个碱基的新型e13a3型转录本；患者2为插入131个碱基的e13a3转录本。DNA产物测序分析证实，他们的BCR基因断裂发生在第13内含子，ABL基因断裂点位于第2内含子，DNA水平的断裂位点与cDNA水平的融合位点完全相同。由于内含子序列的插入，导致编码框改变，翻译提前终止于BCR基因第13内含子同一位点，缺失了ABL基因区，产生一个BCR第13外显子羧基端插入20个氨基酸的截短型蛋白。结论：这种新型的e13a3转录本的形成，是由于DNA水平发生断裂重排造成的，而不是mRNA异常剪接造成的。