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黄芪(Astragalus)素以“补气诸药之最”著称。具有保护心血管系统,抗心率失常,扩张冠状动脉和外周血管,降低血压,减少血栓形成,降血脂,抗衰老,抗缺氧,抗辐射,保肝等作用。本实验以氧化稳定性实验(OSI)确定中药黄芪抗氧化活性部位,并以高脂胆固醇喂养法和人血管内皮细胞(Ve)培养技术分别建立体内、体外动脉粥样硬化(AS)模型,综合研究黄芪抗氧化活性成分对AS的改善作用。
首先用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇为溶剂对黄芪进行索氏抽提。在此基础上,用氧化稳定测定仪(OSI)筛选确定了黄芪乙酸乙酯为其抗氧化活性最强部位。
其次通过人血管内皮细胞(Ve)体外培养技术,从促细胞生长方面筛选了黄芪石油醚、乙酸乙酯、95%溶剂乙醇提取部位,结果表明在5~30μg/ml时,黄芪乙酸乙酯提取部位细胞增值效果最好。促细胞生长作用大小依次为:乙酸乙酯提取物>95%乙醇提取物>石油醚提取物。
根据OSI法和人血管内皮细胞体外培养实验,确定黄芪乙酸乙酯部位为其最强抗氧化部位,同时具有较强的促Ve细胞生长作用。故将乙酸乙酯提取物作为目标分离组分,运用硅胶柱层析、TLC等分离手段对黄芪乙酸乙酯部位进行分离提纯,并得到了三个单体化合物,根据其理化性质和波谱分析,鉴定其分别为:β-谷甾醇、芒柄花素、毛蕊异黄酮。将获得的单体化合物进行体外细胞实验,发现三种化合物都具有较好的促Ve细胞增殖作用,及缺氧损伤保护作用。
分离得到的单体化合物β-谷甾醇、芒柄花素、毛蕊异黄酮进行体外细胞实验,检测其促VE细胞生长及对连二亚硫酸钠造VE细胞缺氧损伤的保护作用,并以西药抗动脉粥样硬化药物(AASDs)洛伐他汀(Lov)作阳性对照。最终结果表明,在促细胞生长发面及缺氧损伤保护作用方面,各实验浓度下,各给药组效果不同。综合来看,促细胞生长作用大小依次为:毛蕊异黄酮>芒柄花素>β-谷甾醇>洛伐他汀;缺氧损伤保护作用大小依次为:芒柄花素>毛蕊异黄酮>洛伐他汀>β-谷甾醇。
最后,本实验采用高酯饲料喂养鹌鹑造动脉粥样硬化模型(AS),考察黄芪抗氧化活性组分及其与三七总皂甙(PNS)配伍组分对实验性动脉粥样硬化的影响,并以目前市场上广范使用的心血管药物洛伐他汀做阳性对照。给药8周,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总抗氧化能力(T-AOC),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量。结果表明黄芪抗氧化活性组分及其与PNS配伍组分可显著(P<0.1)降低血清TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C系数和MDA,升高血清HDL-C及T-AOC、SOD水平,对高脂胆固醇鹌鹑动脉粥样硬化具有很好的改善作用。
体内体外实验综合表明,黄芪抗氧化组分对连二亚硫酸钠缺氧损伤VE细胞有防治效果,对高脂胆固醇鹌鹑动脉粥样硬化具有很好的改善作用。