胰腺导管腺癌(Pancreatic Ductal Adenocarcinoma,PDAC)是世界上恶性程度最高的肿瘤之一,5年生存率小于5%,位居全球癌症相关死亡原因的第4位。手术切除是目前治愈该病的唯一机会,然而,大多数胰腺癌患者被诊断为此病时已处于疾病进展期,失去了手术切除的最佳时机。在疾病进展阶段,化疗和放疗是最适宜的治疗措施。但是由于胰腺癌本身的分化程度,容易对化疗药物产生耐药性,对放疗的敏感性也会降低,不能有效地改善患者预后。因此,探寻新的针对胰腺癌的药物治疗手段是当务之急。研究表明,代谢综合征如糖尿病、肥胖、高脂血症等为胰腺癌的危险因素,80%的胰腺癌患者确诊时同时患有新发糖尿病或糖耐量异常。二甲双胍是最常用的治疗2型糖尿病的口服降糖药物,对于同时患有实体肿瘤(包括胰腺癌)的糖尿病患者,服用二甲双胍不仅能预防肿瘤的发生,还有治疗作用,而且在非糖尿病的肿瘤患者中仍然有效。这意味着二甲双胍的抗癌作用是独立于降糖作用之外的。此外,二甲双胍还能联合化疗药物增强治疗效果。但其中相关机制尚未阐明。MicroRNA(miRNA)是一组单链非编码RNA小分子,在进化过程中高度保守,在血浆中稳定存在,miRNA表达的变化可引起人类疾病,包括肿瘤。MiRNA通过调节不同的致癌信号通路,可促进肿瘤细胞不受控制地快速增长,与此同时,还增强肿瘤细胞的迁移性、侵袭性以及抵抗抗癌治疗。MiRNA在肿瘤的发生及进展中发挥着至关重要的作用。已有报道指出,改变某些miRNA的表达可改善乳腺癌和胰腺癌的预后。血浆miRNA有可能成为临床上诊断某些疾病的标志物,尤其是早期肿瘤的检测。有临床研究报道,miRNA已作为新型生物学标记用于诊断早期结直肠癌,以及预测一些人类癌症的预后情况。目前二甲双胍抗癌具体机制仍不清楚。MiRNA的调控可能是其中一个十分重要的途径。第一部分二甲双胍效应miRNA的筛选及其靶基因的预测【目的】采用Affymetrix miRNA3.0和Affymetrix HTA2.0芯片技术对二甲双胍处理前后的PANC-1细胞RNA进行检测,根据芯片结果筛选获得二甲双胍抑癌效应miRNA及其靶基因。通过二甲双胍和miRNA的机制研究,我们希望获得治疗复发难治以及耐药胰腺癌的新策略或增强传统疗效的联合治疗措施。【方法】体外常规培养人胰腺癌PANC-1细胞株,用20mmol/L二甲双胍处理48h,同时设置空白对照组,提取两组细胞总RNA。利用NanoDrop ND-2100定量并经Agilent 2100检测RNA完整性。质检合格后,分别采用Affymetrix miRNA3.0和Affymetrix HTA2.0芯片技术进行检测。按照筛选标准(T检验的p值