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研究背景:乳腺癌的发生发展是一个十分复杂的过程,是多种异常基因共同作用的结果。溶酶体相关4次跨膜蛋白质B(Lysosome-associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4B)是一个潜在的癌基因,该基因可促进肿瘤细胞的生长及增殖、迁移及侵袭、抗肿瘤细胞凋亡、诱导药物的多药耐药。LAPTM4B-35蛋白在多种类型的实体肿瘤中呈高表达。经文献证实该基因可参与乳腺癌的发生发展过程,影响乳腺癌患者的预后,可对乳腺癌的诊断及预后提供参考价值。提示LAPTM4B可能会成为乳腺癌治疗的潜在的靶点。P27是一种抑癌基因,其表达的蛋白是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKIs)的一种。可通过多种方式参与细胞周期的调控,阻止细胞从G1期到S期的转变,抑制细胞分裂、增殖,促进细胞分化、凋亡。大量的研究结果显示,在多种肿瘤内P27均有异常表达,且在乳腺癌患者的激素治疗、放疗和化疗中可能存在应用价值。但是探讨LAPTM4B与P27在乳腺癌中的关系的相关报道甚少。因此,研究LAPTM4B与P27在乳腺癌的发生发展中作用,应用于指导乳腺癌临床治疗是很有价值的。研究目的:应用TCGA数据库探讨LAPTM4B在乳腺癌和乳腺正常组织,以及乳腺癌各亚型中的表达情况。通过采用小干扰RNA(siRNA)介导的基因沉默技术,观察沉默LAPTM4B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖、凋亡及迁移活性的影响。此外,通过沉默LAPTM4B及P27基因,探讨两个基因之间可能存在的联系,以期为LAPTM4B基因作为乳腺癌治疗的靶点提供进一步理论依据。研究方法:运用TCGA数据库,分析LAPTM4B在乳腺癌及乳腺正常组织中的表达情况,及其在乳腺癌各分子亚型中的表达情况。化学合成针对LAPTM4B和P27基因的siRNA-LAPTM4B序列及siRNA-P27序列。以转染siRNA-LAPTM4B的MDA-MB-231细胞实验组,以转染siRNA-NC的MDA-MB-231细胞为对照组,采用MTT法对细胞的增殖能力进行检测;通过划痕实验检测细胞的迁移能力;通过流式细胞技术对细胞的凋亡能力进行检测。应用脂质体2000试剂将siRNA转染至MDA-MB-231细胞中,转染后48小时后,采用RT-PCR及Western blotting方法分别检测LAPTM4B及P27在mRNA和蛋白质水平的表达情况。研究结果:1.LAPTM4B在乳腺癌组中呈高表达,且在三阴型乳腺癌组中表达最高。2.MTT方法检测结果显示:沉默LPTM4B基因后12小时,24小时,48小时,72小时,沉默LAPTM4B组细胞增殖率明显低于对照组。3.流式细胞术检测结果显示:沉默LAPTM4B基因后,沉默LAPTM4B组细胞凋亡率较对照组明显升高。4.划痕实验结果显示:沉默LAPTM4B基因后,沉默LAPTM4B组细胞迁移能力明显低于对照组。5.RT-PCR检测结果显示:沉默LAPTM4B组的LAPTM4B的mRNA水平与对照组相比呈显著下降,相应的P27的mRNA水平较对照组降低。沉默P27组的P27的mRNA水平与对照组相比呈显著下降,相应的LAPTM4B的mRNA水平亦较对照组降低。6.Western blotting检测结果显示:沉默LAPTM4B组的LAPTM4B-35蛋白表达水平较对照组显著降低,P27蛋白表达水平亦较对照组降低。沉默P27组的P27蛋白表达水平较对照组显著降低,LAPTM4B-35蛋白表达水平亦较对照组降低。结论:1.LAPTM4B在乳腺癌中呈高表达,且在三阴型乳腺癌中表达最高。2.沉默LAPTM4B可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移能力,促进细胞凋亡。提示LAPTM4B基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、增殖及迁移方面能够通过某种机制发挥调控作用。3.沉默LAPTM4B基因可以降低乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的P27基因的表达,同时沉默P27基因后,LAPTM4B基因的表达亦降低,提示LAPTM4B和P27基因可能通过某些信号通路或某些基因相互调控。