【摘 要】
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多酚类及其衍生物氧化缩合可形成茶黄素,可与乙酸乙酯互溶,产生橙黄色物质。红茶中的主要成分之一茶黄素（theaflavins,TFs）,对于红茶的色香味品质有着决定性作用。目前,茶黄素中研究的主要成分主要包括茶黄素单没食子酸酯（茶黄素-3-没食子酸酯和茶黄素-3’-没食子酸酯）、茶黄素、茶黄素-3,3’-没食子酸酯。根据国内外大量研究表明,茶黄素具有抗炎、抗氧化、抑菌、降糖和抗癌等多种功能作用。本文
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多酚类及其衍生物氧化缩合可形成茶黄素,可与乙酸乙酯互溶,产生橙黄色物质。红茶中的主要成分之一茶黄素（theaflavins,TFs）,对于红茶的色香味品质有着决定性作用。目前,茶黄素中研究的主要成分主要包括茶黄素单没食子酸酯（茶黄素-3-没食子酸酯和茶黄素-3’-没食子酸酯）、茶黄素、茶黄素-3,3’-没食子酸酯。根据国内外大量研究表明,茶黄素具有抗炎、抗氧化、抑菌、降糖和抗癌等多种功能作用。本文主要研究从红茶末中提取分离经过纯化得到茶黄素。并且研究茶黄素的抗氧化作用和茶黄素-3,3’-没食子酸酯抑制癌细胞增殖作用。主要研究内容如下:（1）通过采用三因素三水平正交试验分析研究确定了分离制备茶黄素的最优工艺。首先采用热水浸提法去除茶黄素中多余的杂质,基于对正交数据的分析,料液比1:30,提取温度为70℃,水浴时间为80 min,优化之后会的工艺条件提出的茶黄素纯度达到30.56%。（2）本文从分离系数K和分离度α两方面探讨,选择不同的分离体系。通过采用高效液相（HPLC）检测各分离体系的上下相,计算比较分离系数K和分离度α,可确定甲醇-乙酸乙酯-正己烷-水-冰醋酸（1:5:1:5:0.25,V/V）体系的K和α的数值比较好。并且采用连续色谱分离技术,进一步分离茶黄素和儿茶素,旨在提高茶黄素的得率和纯度。TF的纯度由原来的23.11%提高到了32.14%,而TFDG的纯度在也由原来的89.68%提高至95.38%。（3）研究ABTS+、DPPH·、·OH清除自由基作用,通过实验研究可得,茶黄素都具有较强的抗氧化作用,并且抗氧化作用呈剂量依赖性增强。而酪氨酸酶在则是黑色素积累过程中的关键限速酶,分析茶黄素与酪氨酸酶之间得结合作用,探究TF、TF-3-G、TF-3-G、TFDG与酪氨酸酶间的结合方式,发现TF各单体可通过占据酪氨酸酶活性中心作用位点从而抑制相应活性,可得结论茶黄素可作为酪氨酸酶抑制剂研究开发相应的抗氧化物质。（4）通过预实验发现茶黄素-3,3’-没食子酸酯抑制癌细胞增殖作用最强,所以选择茶黄素-3,3’-没食子酸酯研究对癌细胞的抑制作用,CCK-8法检测其对肝癌细胞（Hep G-2）和结肠腺癌细胞（Caco-2）的作用,发现茶黄素-3,3’-没食子酸酯随着浓度的增大,时间的延长,Hep G-2和Caco-2细胞的增殖速度明显减缓,且呈时间和剂量依赖性。有研究证实癌症的预防和醌还原酶（QR）存在某种关系,将实验数据和理论联合,采用分子对接技术验证茶黄素-3,3’-没食子酸酯和QR能够形成稳定的络合物,诱导QR的活性,可以增强抗癌效果,为以后深入研究茶黄素对癌细胞的作用提供基础。
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