长白山鸡爪苓菌丝体全长cDNA文库的初步构建

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鸡爪苓是长白山区特异的野生猪苓[Polyponus umbellatus (Pers.)Fr]种属,为传统药用真菌,具有利水渗湿等功效,近年来因其免疫增强、抗肿瘤及抗菌等功效发现,越来越受到人们的关注。目前,国内主要研究猪苓的药理活性物质及其功能的的测定等方面。猪苓药理活性物质相关的功能基因组研究尚未见报道。本试验以不同时间段培养的鸡爪苓菌丝体为材料,建立鸡爪苓菌丝体的总RNA提取方法。采用Trizol法和Trizol改良法提取7d、14d、21d、28d纯培养鸡爪苓菌丝体总RNA,其纯度和完整度满足后续实验的要求。将不同时间段总RNA混合,采用SMART技术初步建立了以XTriplEx2为载体的鸡爪苓菌丝体全长cDNA文库。未扩增cDNA文库的滴度为1.69×106pfu/mL,重组率为97.06%,目的片段主要分布于500~2000bp。扩增文库的滴度为1.504×1010pfu/mL选取六个单克隆进行测序,长度分别为627bp、878bp、941bp、652bp、766bp、1293bp,均为全长cDNA,具有ORF。在Nr/Nt数据库中进行Blastn和Blastx分析,其中4个EST序列存在高相似度ESTs和蛋白质序列。结果表明,成功提取鸡爪苓菌丝体总RNA,并构建其高质量全长cDNA文库,为深入研究鸡爪苓免疫增强和抗肿瘤作用机制提供理论基础。
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