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本实验室自行开发制备了粒径为100~300μm纤维素磁性微球(MCMS),但与国外微米级的磁性微球相比,其粒径较大,而且磁响应性也较差。为了提高和改善MCMS的性能,本研究利用高速匀浆新技术,通过控制成球时匀浆分散速度的方法制备了一系列不同粒径的MCMS,之后分别对包括产率、平均粒径、磁特性、蛋白偶联和抗体偶联情况等性能进行了考察和表征。
本研究建立了一套完整的制备各个不同粒径MCMS的工艺体系,所制备的MCMS产品具有“草莓型”的外观结构,结果得到6种平均粒径分别为3.46、5.82、9.93、14.03、61.86和120.34μm的MCMS。为实现抗体分子在MCMS表面简便高效固定化策略,本研究还引入了具备与纤维素和IgG特异性结合的双功能融合蛋白CBD-ProA,同时采用融合蛋白CBD-EGFP进行蛋白结合灵敏度的考察,结果发现粒径为5.82μm MCMS的融合蛋白结合率最高,其对应的抗体吸附量也最高,为186.8mg/mL,我们提出了该工艺下MCMS制备的“最小临界粒径”理论,并以此为指导开展了免疫磁性捕获的研究。
根据国家食品安全法及国家标准GB/T4789.4-2008,GB/T4789.5-2003,GB/T4789.17-2003,GB/T4789.6-2003和GB/T4789.3-2008的规定,食品中不允许任何沙门氏菌、志贺氏菌和肠道致病性大肠艾希氏菌的存在。因此本论文以沙门氏菌、志贺氏菌和肠道致病性大肠艾希氏菌等重要病原微生物为研究对象,以国标检测法为对照,进行了病原微生物的免疫磁性捕获鉴定的研究。本研究分别对水、牛奶、花生酱、生肉和火腿中的上述三种病原微生物进行了免疫磁性捕获的检测研究。结果表明,与国标检测方法相比,检测时间缩短了约2天,检测灵敏度提高了10倍以上,进一步结合免疫磁性捕获-PCR(IMCPA)技术将检测灵敏度提高了100倍以上。
本研究建立并完善了MCMS制备工艺体系,提出了“最小临界粒径”理论,开发了可以快速生物致敏的偶联技术,尝试了免疫磁性捕获技术在微生物分离鉴定领域中的应用,并探讨了灵敏度更高的IMCPA方法,为磁性微球产品的开发和推广应用奠定了基础。