酒精性肝损伤是一种临床上常见的肝脏损伤性疾病,发病率高,危害性大,且发病机制复杂。肠道屏障功能受损及其引起的肠源性内毒素血症被认为是酒精性肝损伤发生和发展的关键因素。益生菌已被证明具有改善肠道屏障功能、调节肠道菌群和提高机体免疫力等多种益生功能。目前,已有研究表明,益生菌可以缓解酒精所致的肠道屏障损伤和肝脏损伤,但主要集中在国外商业菌株,且缺少针对改善酒精诱导的肠屏障损伤的益生菌筛选模型。因此,本课题以乳杆菌为研究对象,从改善肠道屏障功能角度探寻酒精性肝损伤的干预措施,利用体外肠细胞屏障模型,进行初步筛选,评价了不同菌株对肠细胞屏障的保护作用,并利用动物模型对细胞筛选的结果进行了验证,最后研究了所选菌株及其复合制剂对慢性酒精性肝损伤的缓解作用。首先,建立了酒精暴露的Caco-2细胞单层屏障模型,以鼠李糖乳杆菌LGG作为阳性对照菌株,评价了86株实验菌株对肠上皮细胞屏障的保护作用。结果表明,酒精暴露导致了Caco-2细胞单层屏障完整性受损,通透性增加。86株实验菌株对受损细胞单层屏障的恢复效果各异,恢复率在58.40%~112.60%,并且不存在明显的种间差异。为了验证细胞模型的实验结果,分别筛选了干酪乳杆菌种中效果较好的菌株(RS8-5,恢复率111.67%)和效果较差的菌株(V-CQRC7-161-M2,恢复率58.40%),以及瑞士乳杆菌种中效果较好的菌株(D-7-S146,恢复率112.60%)和效果较差的菌株(8M-10,恢复率67.91%),评价这些菌株对小鼠慢性酒精性肝损伤的缓解效果。建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,并以所选菌株进行干预。结果表明,慢性酒精暴露导致了小鼠肠道屏障损伤、肠道菌群紊乱,以及小鼠肝脏损伤、脂肪堆积、肝脏氧化应激和肝脏炎症反应。而在细胞实验中效果较好的干酪乳杆菌RS8-5和瑞士乳杆菌D-7-S146,可以有效抑制慢性酒精暴露导致的小鼠肠道紧密连接蛋白表达水平的下调和内毒素血症,恢复肠道菌群平衡,并有效减轻小鼠肝脏脂肪堆积,降低血清转氨酶和血脂水平,缓解肝脏氧化应激和肝脏炎症反应。在细胞实验中对细胞单层屏障没有明显保护作用的干酪乳杆菌V-CQRC7-161-M2和瑞士乳杆菌8M-10,对小鼠酒精性肝损伤的缓解则没有显著效果。这些结果与细胞实验的结果相符。进一步验证细胞筛选结果的可靠性,分析了细胞实验结果与动物实验结果的相关性,Pearson相关系数为-0.97。结果表明,细胞模型筛选结果与动物实验结果具有较强的相关性,提示Caco-2细胞单层模型可作为体外筛选具有缓解酒精性肝损伤潜能的益生菌的初步筛选模型。最后,以筛选得到的效果较好的干酪乳杆菌RS8-5和瑞士乳杆菌D-7-S146,与已报道的具有缓解酒精性肝损伤功能的膳食成分葛根、枳椇子、山楂、枸杞、桑葚、低聚果糖和低聚半乳糖,组成了五种不同配方组合的益生菌复合制剂,并评价其对小鼠慢性酒精性肝损伤的缓解作用。结果表明,五种组合的益生菌复合制剂均可有效抑制慢性酒精暴露导致的小鼠肠道屏障损伤和内毒素血症,缓解小鼠肝脏损伤、肝脏氧化应激和肝脏炎症反应。其中,以干酪乳杆菌RS8-5、瑞士乳杆菌D-7-S146、葛根、枳椇子、山楂和低聚果糖组成的配方一+混菌组合的效果最为显著。本研究结果为筛选具有缓解酒精性肝损伤潜能的益生菌提供了一种可能的体外筛选模型,并进一步选育得到了可以有效缓解酒精性肝损伤的功能菌株,为酒精性肝损伤的膳食防治提供了潜在的干预措施。