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目的:统计资料显示,恶性肿瘤跃居我国城市居民疾病死因首位,国外肿瘤是其次于心血管疾病的第二大致病因素,侵袭、转移是其恶性生物学行为的原因,其中淋巴道转移主要是上皮来源的肿瘤转移的方式,也是肿瘤早期的主要转移方式,但是其作用机制不清楚。我们实验室通过比较小鼠腹水型肝癌高低淋巴道转移细胞株的差异因子,寻找在淋巴道转移中可能发挥作用的蛋白。基因芯片和蛋白组学方法得到大量差异表达的因子,为肿瘤淋巴道转移机制深入研究提供了靶点。我们发现细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)和烯酰水合酶辅酶1(ECH1)在mRNA和蛋白水平在高淋巴道转移细胞株Hca-F中高表达,可能在肿瘤转移中发挥重要的作用。CLIC1作为膜通道蛋白,具有可溶型和膜结合型两种形式,分布各种组织中,参与重要生理过程。近年报道CLIC1在多种肿瘤中高表达,但是未见关于淋巴道转移方面的报道。ECH1分布于过氧化物酶体,是脂肪酸β氧化过程中加水反应的关键酶,在多种肿瘤中异常表达,但也未见肿瘤淋巴道转移方面的报道。本文主要研究CLIC1和ECH1在小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株Hca-F和低淋巴道转移细胞株Hca-P的细胞定位及蛋白表达差异,为进一步研究奠定基础。方法:小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移株Hca-F和低淋巴道转移株Hca-P作为研究对象,观察细胞免疫荧光和免疫化学染色检测定位情况,并以Westen Blot方法检测蛋白表达情况。结果:细胞免疫荧光:CLIC1在Hca-F和Hca-P均有表达,位于细胞浆、细胞膜。但是两株细胞株细胞膜定位差异不是很明显。ECH1在Hca-F和Hca-P中均有表达,位于细胞浆。细胞免疫化学染色:CLIC1在Hca-F和Hca-P中均有表达,位于细胞浆、细胞膜。染色强度+++;在Hca-P的染色强度++,并且镜下随机选取10个视野,观察细胞膜定位的比率,统计分析结果显示CLIC1在Hca-F和Hca-P中的膜定位表达没有明显差异(P>0.05)。ECH1在Hca-F和Hca-P中均有表达,主要位于细胞浆;Hca-F强度+++,Hca-P强度++。图像分析CLIC1在Hca-F的IOD/area是0.48,在Hca-P的IOD/area是0.42,P<0.05;ECH1在Hca-F的IOD/area是0.324,在Hca-P的IOD/area是0.285,P<0.05。Wstern Blot:定量软件分析CLIC1、ECH1和β-actin的光密度值(IOD),以CLIC1在Hca-P中的表达相对值为1,在Hca-F中高表达1.6倍,具有统计学意义(P<0.05),同样的方法得到ECH1在Hca-F中表达较Hca-P高1.5倍,具有统计学意义(P<0.05).结论:CLIC1表达于Hca-F和Hca-P的胞浆和胞膜,两者之间的细胞膜定位没有明显的差异,并且CLIC1在Hca-F中的表达明显高于Hca-P;ECH1表达于Hca-F和Hca-P的胞浆,在Hca-F的表达明显高于Hca-P,与基因水平和蛋白水平的的实验结果一致,更加证明了CLIC1和ECH1在肝癌淋巴道转移中的潜在作用。