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目的:核糖体对于每个细胞中的蛋白质合成来说都是必不可少的。研究表明将细胞增殖与核糖体生物发生联系起来的核仁蛋白是潜在的致癌基因,人的SURF6蛋白是进化保守核仁蛋白中的一种,具有未知的功能,针对该蛋白的研究可能为肿瘤治疗提供新的思路。研究证实,在肿瘤细胞中SURF6基因高表达,这种高表达可能为肿瘤提供核糖体原料来实现其高蛋白表达,但具体参与机制仍然不清楚。因为在裂殖酵母中进行分子生物学操作简便、快捷,同时rrp14基因编码的蛋白与人SURF6蛋白氨基端高度同源,所以本实验选择裂殖酵母作为研究对象来研究蛋白的功能。在裂殖酵母中,SURF6基因分割为rrp14及rrp1402两个不同的基因,它们编码的蛋白分别对应于SURF6的N端及C端,这为我们单独研究SURF6的N端提供了天然的模式生物。本实验中,我们将研究rrp14基因对蛋白的核仁转运以及核糖体RNA的影响。方法:运用基因同源重组的方法制备rrp14基因敲除的酵母,观察酵母生长状况。运用质谱、免疫共沉淀、免疫荧光显微镜等方法研究酵母中原位标记的Rrp14蛋白以及Pol5蛋白之间的关系。运用分子克隆的方法构建所需质粒后转入酵母中,通过Pil1共锚定实验寻找Rrp14蛋白与Pol5蛋白相互作用的区域。运用于CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术筛选出所需酵母,观察酵母的生长状况。通过提取RNA以及实时定量PCR观察rrp14基因对核糖体RNA的影响。结果:生长实验表明rrp14敲除影响细胞生长。质谱、免疫共沉淀、免疫荧光显微镜结果表明Rrp14蛋白与Pol5蛋白互作并共定位于核仁,同时Rrp14可能具有辅助Pol5核仁定位的功能。Pil1共锚定实验表明Rrp14蛋白可能通过第7-12号氨基酸与Pol5蛋白发生相互作用。且Rrp14蛋白不与Pol5蛋白互作会影响酵母生长。与野生型酵母相比敲除Rrp14蛋白第7-12号氨基酸以及敲除rrp14的酵母总RNA含量是不断降低的。且实时定量PCR显示28S、18S、ITS1的含量不断减少的,这表明rrp14基因会影响核糖体RNA的转录。结论:1、Rrp14与Pol5蛋白在核仁中呈物理间相互作用;2、Rrp14通过7-RINAWN-12结构域与Pol5相互作用;3、Rrp14具有辅助Pol5核仁内转运的功能;4、Rrp14通过影响Pol5核仁内转运而影响rRNA的转录。