土壤线虫对根际细菌P13和S3-1传播作用的研究

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线虫在动物界中数量最丰富的动物之一,它们在淡水、海水、陆地上随处可见。土壤线虫主要包括自由生线虫和植物寄生线虫,在植物根际尤为密集,并因此与根际微生物存在着复杂多样的交互关系。近年来,利用秀丽线虫作为指示生物筛选毒力较强的生防菌株进行植物寄生线虫的生物防治成为研究热点。生防菌株能够产生有毒次级代谢产物,在短期内对线虫产生致死效应,或在长期作用下减缓线虫生长、抑制线虫产卵、降低线虫运动能力。另一方面,自由生线虫能够以细菌作为食物,优先选择无毒或好吃的细菌,远离有毒或不好吃的细菌,并且能够将其携带细菌运送至植物根际。国内外对于线虫与细菌相互作用关系多集中在病原菌,对其与根际益生菌生态关系以及对线虫——根际益生菌——植物三者交互作用的研究都很少。本课题中通过的缓慢杀线实验、共培养毒性实验和偏好性实验分析了秀丽线虫对两株根际益生菌:荧光假单胞菌P13(Pseudomonas fluorescens P13)和解淀粉芽孢杆菌S3-1(Bacillus amyloliquefaciens S3-1)传播的可能性;荧光显微镜和透射电子显微镜对线虫肠道细菌存在情况进行定性分析,平板稀释涂布确定线虫携带细菌总量,线虫——植物根部趋向性实验探索了线虫携带细菌向植物根际定向运动的能力。P13和S3-1对秀丽线虫的慢性致死率分别为12.12%和3.0%,S3-1对秀丽隐杆线虫几乎没有杀线虫活性,而P13表现出了较低的杀线虫活性。在与P13和S3-1共同培养5天后,相对于OP50,线虫每10s身体弯曲次数分别为4.68和4.33,对线虫运动没有产生抑制作用,且线虫能够继续生长、繁殖。相对于OP50,秀丽隐杆线虫偏好捕食根际益生菌P13和S3-1,选择系数分别为0.13和0.52。与P13相比,线虫更偏好捕食S3-1,选择系数为0.32,可能是P13产生的HCN对线虫有毒害作用抑或芽孢杆菌是土壤中含量最多的菌株,线虫根据经验会选择较为熟悉的菌株作为食物。综合缓慢杀线实验、共培养毒性实验和偏好性实验我们初步判断线虫能够以细菌为食,并可能对两株根际益生菌进行传播。荧光显微镜观察P13菌苔中的线虫,发现线虫消化道中有黄色荧光;透射电子显微镜观察了P13和S3-1中培养的秀丽线虫肠道横切面,发现了P13和S3-1菌体细胞,P13的一些菌体细胞已经破碎,而S3-1由于芽孢保护完整性较高。线虫体表携带两种细菌量分别为3.07×103±32(P13),71±12(S3-1),体内携带细菌数量分别为9.5×102±36(P13),8.96×102±21(S3-1)。线虫对P13携带总量较高为4.02×103±47,而S3-1较低为9.67×102±22,对两株菌携带量有明显差异。对于秀丽线虫肠道细菌观察以及线虫体表及肠道细菌携带量结果表明,线虫能够携带P13和S3-1进行传播。在线虫——植物根部趋向性运动实验中,与对照组相比,接种线虫后菌落范围扩大且线虫能够向拟南芥和小青菜根部定向运动。并且我们在两种植物根际分离出了P13和S3-1,每株植物根表面含菌量高达105CFU。线虫体表和代谢到环境中的细菌能够随线虫运动传播至根物根际,并有效定殖。而根际益生菌和线虫共同作用,能够增加植物干重和鲜重,促进植物根和茎的伸长,有效地促进了植物生长发育。实验结果充分表明线虫能够传播定向传播P13和S3-1,促进植物生长。利用秀丽隐杆线虫可以作环境指示生物的优势,与细菌共培养,在发挥其生防作用的同时筛选环境友好型生防菌株,既能有效的促进植物生长也能保护土壤原有的生态环境,最大程度上维持土壤生态系统的稳定性,有效地控制了农作物病害,土壤生态向健康的方向发展,对维持土壤生态平衡有非常重要的意义。
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