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目的：探讨新西兰大白兔外周血来源内皮祖细胞（EPCs）体外分离、培养和分化的方法，并对培养细胞进行鉴定。观察过氧化氢（H2O2）诱导的内皮祖细胞氧化损伤效应以及川芎嗪（TMP）抗氧化应激的效应。
方法：采用密度梯度离心法获取新西兰大白兔外周血中单个核细胞（MNCs），于纤连蛋白（FN）包被的培养板中EBM-2完全培养基诱导分化得到EPCs，从细胞形态、免疫荧光、免疫细胞化学分析表面标记物鉴定EPCs。以600umol/L过氧化氢（H2O2）诱导EPCs氧化应激损伤，实验分为正常对照组，H2O2作用组，H2O2/川芎嗪干预组（川芎嗪浓度为10ug/ml），应用CCK-8法检测H2O2和TMP对EPCs增殖的影响，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，TBA法测定细胞浆中丙二醛（MDA）含量，分别采用黄嘌呤氧化酶法和比色法测定细胞培养液上清总超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）活力。
结果：新西兰大白兔外周血分离得到的MNC5经体外诱导培养呈内皮细胞样形态，表达EPCs的表面标志物CD31、CD34和VEGFR-2等，显示内吞乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL）、结合荆豆凝集素1（UEA-1）等内皮细胞的功能特性，提示培养细胞具有EPCs的形态、功能和表面蛋白特性。H2O2抑制体外培养的EPCs增殖，且呈浓度依赖性。不同浓度川芎嗪作用于EPCs后可促进细胞增殖，但10ug/mlTMP较1ug/ml浓度组吸光度增加更明显，20、50、100ug/ml浓度组与10ug/ml组相比无显著性差异。流式细胞分析显示H2O2组细胞凋亡率与对照组相比明显增高，川芎嗪干预组明显抑制H2O2诱导的EPCs凋亡。H2O2可导致EPCs中MDA含量、LDH渗出量明显增加和SOD活性的下降，而川芎嗪干预可明显抑制EPCs的氧化应激反应。
结论：兔外周血中存在具有分化增殖能力的EPCs，可通过密度梯度离心法分离得到，在体外经诱导培养后可稳定分化、扩增。H2O2抑制EPCs增殖，川芎嗪促进EPCs增殖并对H2O2诱导的EPCs凋亡和氧化损伤有一定的保护作用。