目的:tTG 是转谷氨酰胺酶家族中的一员,既往的研究提示,tTG参与了组织纤维化的形成。肾间质成纤维细胞是肾间质纤维化形成的主要效应细胞。本文以体外培养的人肾间质成纤维细胞为研究对象,观察成纤维细胞 tTG 的表达及 TGF-β1 对其表达的影响。 方法: 1.人肾间质成纤维细胞的原代培养与鉴定: 取人肾肾乳头组织,切碎后经胶原酶消化,用含 20%FCS 的 RPMI 1640 培养液在 5%CO2、37℃孵育箱中培养。通过细胞形态、免疫细胞化学检测波形蛋白和右旋缬氨酸选择性培养基培养作细胞鉴定。 2.tTG mRNA 表达的检测: 以不同浓度的 TGF-β1(1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml)刺激成纤维细胞 24 小时,用不加刺激物的成纤维细胞作对照;2ng/ml TGF-β1 刺激细胞不同时间(8 小时、24 小时、36小时),用不加刺激物的成纤维细胞作对照。分别提取各组细胞的总RNA,RT-PCR 检测 tTG mRNA 的表达。 3.tTG 蛋白表达的检测 以不同浓度的 TGF-β1(1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml)刺激成纤维细胞 24 小时,用不加刺激物的成纤维细胞作对照;2ng/ml TGF-β1 刺激细胞不同时间(8 小时、24 小时、36 小时),用不加刺激物的成纤维细胞作对照。以细胞免疫化学技术和 Western Blot 分别检测不同刺激浓度