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氨基酸(amino acids)作为植物中重要的初级氮代谢产物,其浓度和氮同位素组成已被广泛应用于研究植物对不同环境压力(如:高温、重金属、干旱、水淹等)下氮代谢机制的改变。氨基酸通过调节植物体内的代谢平衡,能降低环境压力对植物造成的伤害,保证植物在环境胁迫下的生存。目前,国内外关于植物耐淹机制的研究较多,但利用植物组织中游离氨基酸浓度与氮同位素来研究植物对水淹时间和水淹深度的响应研究较少。因此,通过分析植物组织中的游离氨基酸对水淹的响应,以及游离氨基酸氮同位素组成对水淹胁迫的示踪,以期明确植物在水淹胁迫下氮代谢的适应机制,为植物的保护提供科学的理论支持。本文研究内容主要包括两个方面,一方面是氨基酸标准溶液的浓度及其氮同位素的测定及校正,为植物样品浓度及其氮同位素的测定提供基础。另一方面是以鄱阳湖湿地采集的芦苇(Phragmites australis(Cav.)Trin.ex Steud.)为材料,进行了不同深度下为期11天的水淹实验,通过测定芦苇叶片组织中的总碳氮含量及其同位素组成和游离氨基酸浓度及其氮同位素组成,探讨芦苇在不同水淹条件下氮代谢机制的变化。主要研究结果如下:(1)GC-MS-IRMS测定了浓度范围在0.041nmol/μL的20种氨基酸混合标准溶液的游离氨基酸含量和特丁基二甲基硅烷化氨基酸衍生物(tBDMSi)氮同位素值。以氨基酸浓度为纵坐标(Y),以峰面积与内标峰面积比值为横坐标(X),得到了20种氨基酸线性回归方程。结果显示,各氨基酸的相关系数在0.99000.9971之间;氨基酸浓度的标准偏差在0.003%0.014%之间,平均标准偏差为0.008%;氨基酸氮同位素值的标准偏差在0.05‰1.16‰之间,平均标准偏差为0.48‰。表明该方法可用于氨基酸浓度及其氮同位素值的分析测定。(2)为了校正GC系统和硅烷化衍生反应造成的氨基酸氮同位素的分馏,本研究对比了GC-MS-IRMS测定的20种氨基酸混合标准溶液的tBDMSi氮同位素平均值和EA-IRMS 253Plus测定的20种氨基酸单标的真实值。结果表明,GC-MS-IRMS测定值与真实值的差小于1.64‰,说明该方法能很好的校正由GC系统及硅烷化衍生造成的氮同位素分馏。(3)芦苇叶片中的总氮同位素组成(δ15NTN)随着水淹时间的增加逐渐偏负(P<0.05),氨基酸氮同位素组成线性方程中的斜率逐渐远离1,以及芦苇叶片中蛋白质氮同位素组成(δ15NPro)在水淹后有显著变化(P<0.05),均指示植物中的氮代谢受到了环境变化(水淹)的影响。(4)总游离氨基酸(FAA)在水淹4天后其浓度显著下降,而总氮含量(TN)在水淹11天期间无显著变化(P>0.05),表明游离氨基酸对水淹的胁迫比总氮更灵敏。(5)短期水淹胁迫下,芦苇叶片组织中的糖酵解过程被促进,参与糖酵解过程的丝氨酸(Ser)是指示芦苇叶片受到短期水淹胁迫的良好指标。长期水淹胁迫下,芦苇叶片组织中的三羧酸循环(TCA)循环受限,与TCA循环有关的游离氨基酸(Asp,Asn)是指示芦苇叶片受到长期水淹胁迫的一个良好指标。(6)水淹11天后芦苇叶片中谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、苯丙氨酸(Phe)的氮同位素组成有显著差异且变化规律不一致,说明这些单体氨基酸以不同的方式对水淹胁迫做出了响应,表明植物体内的每个生物合成的代谢途径对胁迫的敏感性有差异。