第一部分超声测量兔眼动脉及视神经的可重复性及一致性研究目的探讨彩色多普勒血流显像技术(CDFI)测量兔眼动脉(OA)血流动力学参数以及经眼眶超声(TOUS)测量兔视神经直径(OND)的可重复性和一致性,为进一步研究提供依据。方法1.CDFI测量OA血流动力学参数的可靠性:两名检查者(检查者1和检查者2)按以下顺序分别对31只兔(62只眼)进行CDFI检查:检查者1→检查者2→检查者1,测量OA的血流动力学参数,包括收缩期峰值流速(PSV)、舒张期峰值流速(EDV)、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、收缩期峰值流速与舒张期峰值流速之比(S/D),前后两次检查的时间间隔不超过10分钟。2.TOUS测量OND的可靠性:检查者1和检查者2按以下顺序分别对31只兔(62只眼)进行TOUS检查:检查者1→检查者2→检查者1,于视乳头后方3mm处测量OND值。3.对检查者1前后两次的检查结果进行比较,用于评估检查者内部的测量可重复性;检查者1第一次的测量结果与检查者2的测量结果相比较,评价检查者间的测量一致性。检查者内测量的可重复性采用组内相关系数(ICC)来评价,以ICC<0.20为一致性差;0.20~0.40为一致性一般;0.40~0.75为一致性好;>0.75为一致性非常好;检查者间测量的一致性采用Pearson相关系数及Bland-Altmans散点图分析进行评价。结果1.在非镇静条件下31只兔的OA和视神经均获得良好的超声成像。兔OA的血流频谱与人类相似,呈“三峰两谷”型,但是其收缩期晚期切迹不如人类明显;兔视神经呈一细小条带状低回声位于眼球后方。2.同一检查者测量OA各多普勒血流动力学参数的ICC值均大于0.75,可重复性较高。而相关分析结果显示,不同检查者各血流动力学参数的测值均明显相关,均P<0.001,测量的一致性较高。Bland-Altman散点图进一步证实不同检查者测量兔OA血流动力学参数具有良好的一致性。3.检查者1第一次OND测值、检查者2 OND测值以及检查者1第二次OND测值分别1.19±0.12mm、1.17±0.11mm和1.17±0.11mm,三者无明显差异,P=0.776。同一检查者OND测量的ICC值为0.973,不同检查者OND测值明显相关,r=0.905,P<0.001,Bland-Altman散点图亦进一步表明TOUS测量OND具有很高的可重复性和一致性。结论CDFI测量兔OA以及TOUS测量OND具有简便易行、测量可靠性高的特点,超声技术可广泛用于今后的相关研究中。本研究结果为往后的研究提供了可靠的参考依据。第二部分性激素、球后血流动力学与泪液分泌的相关性研究目的通过分析人体性激素水平、泪液分泌功能以及球后血流动力学三者之间的关系,探讨血流动力学在干眼(DE)发病机制中的作用。方法1.于2016年12月~2017年10月间纳入148名健康志愿者,并按停经时间分别纳入绝经期组(MP组)和非绝经期组(NMP组)。2.CDFI检查前测量并记录每位受试者的身高、体重、血压以及心率;每位受试者行泪液分泌试验(SIt)并测量泪膜破裂时间(BUT);空腹抽取3ml血液,高速离心后储存于-80°C冰箱中备用,电化学发光法统一测量血清雌二醇(E2)和睾酮(T)浓度。3.CDFI测量每位受试者双眼OA、视网膜中央动脉(CRA)以及睫状后短动脉(SPCA)的血流动力学参数,包括收缩期峰值流速(PSV)、舒张期峰值流速(EDV)、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)以及收缩期峰值流速与舒张期峰值流速之比(S/D)。取双眼测值的均值进行统计。4.用独立样本t检验比较两组人员年龄、身高、体重、血压、心率、SIt、BUT、E2以及T的差异;Pearson相关分析检验年龄、E2、T、BUT、SIt和血流动力学参数之间的关系;采用多元线性回归分别对影响SIt及BUT的因素逐一进行筛选。结果1.本研究总共纳入148名受试对象,其中NMP组75人,平均年龄36.6±9.0(岁),MP组73名,平均年龄62.5±10.2(岁),两组人群身高、体重、心率、收缩压(SBP)和舒张压(DBP)无明显差异,均P>0.05。2.两组受试对象E2、T、SIt、BUT值存在明显差异,均P<0.001,MP组血清E2、T以及SIt、BUT值均较NMN组明显减低;两组OA血流动力学参数除PI值外,其余四个参数均存在明显统计学差异(均P<0.001),MP组OA血流速度较NMP组明显减低,而血流阻力则明显增高;两组CRA血流动力学参数除外PSV及PI,其余三个参数均存在明显差异(均P<0.05),MP组EDV值较NMP组明显减低,而RI及S/D值则较NMP组明显增高;SPCA除PI外均存在显著差异(均P<0.05),MP组PSV、EDV值较NMP组明显减低,而RI及S/D值则明显增高。3.年龄与各相关测值的线性相关分析结果显示:年龄与E2、T、SIt、BUT、OA-PSV、OA-EDV、CRA-EDV、SPCA-PSV、SPCA-EDV均呈明显负相关(均P<0.05),而与OA-RI、OA-S/D、CRA-RI、CRA-S/D、SPCA-RI、SPCA-S/D值则呈明显正相关(均P<0.05),其余测值与年龄无明显相关(均P>0.05)。4.E2与各相关测值的线性相关分析结果显示:E2与年龄、OA-RI、OA-S/D、CRA-RI、CRA-S/D、SPCA-RI、SPCA-S/D值呈明显负相关(均P<0.05),与SIt、BUT、OA-PSV、OA-EDV、CRA-EDV、SPCA-PSV、SPCA-EDV呈明显正相关(均P<0.05),与其余相关测值无明显关联(均P>0.05)。5.T与各相关测值的线性相关分析结果显示:T值与年龄、OA-RI、OA-PI、OA-S/D、SPCA-PI呈明显负相关(均P<0.05),而与SIt、BUT、OA-PSV、OA-EDV、SPCA-PSV、SPCA-EDV呈明显正相关(均P<0.05),与其余相关测值无明显关联(均P>0.05)6.SIt与各相关测值的线性相关分析结果显示:SIt值与年龄、OA-RI、OA-S/D、CRA-RI、CRA-S/D、SPCA-RI呈明显负相关(均P<0.05),而与E2、T、OA-PSV、OA-EDV、CRA-PSV、CRA-EDV、SPCA-PSV、SPCA-EDV呈明显正相关(均P<0.05),与其余相关测值无明显关联(均P>0.05)。7.BUT与各相关测值的线性相关分析结果显示:BUT值与年龄、OA-RI、OA-S/D、CRA-RI、CRA-S/D、SPCA-RI、SPCA-PI呈明显负相关(均P<0.05),而与E2、T、OA-PSV、OA-EDV、CRA-PSV、CRA-EDV、SPCA-PSV、SPCA-EDV呈明显正相关(均P<0.05),与其余相关测值无明显关联(均P>0.05)。8.SIt与各相关因素的多元线性回归分析显示:SIt与E2及OA的PSV值呈正相关,与年龄呈负相关(R2=0.695,P<0.05),拟合模型在整体上具有统计学意义(F=109.392,P<0.001)。回归方程为?=6.350-0.118X1+0.225X2+0.038X3(?为SIt,X1为年龄,X2为E2,X3为OA-PSV)。标准偏回归系数的估计值显示E2对SIT的影响大于年龄和OA-PSV对SIt的影响。9.BUT与各相关因素的多元线性回归分析结果显示,BUT与E2及OA的PSV值呈正相关,与年龄呈负相关(R2=0.712,P<0.05),拟合模型在整体上具有统计学意义(F=118.641,P<0.001)。回归方程为?=6.427-0.122X1+0.223X2+0.037X3。(?为BUT,X1为年龄,X2为E2,X3为OA-PSV)。标准偏回归系数的估计值显示E2对BUT的影响大于年龄和OA-PSV对SIt的影响。结论1.性激素水平的高低与泪液分泌、球后血流动力学密切相关;2.年龄增长、E2水平降低以及OA-PSV减低是影响SIt及BUT的独立危险因素,其中E2对泪液分泌的影响最大;3.由性激素水平减低引起的OA血流动力学异常有可能是绝经期女性DE的发病机制之一。第三部分HRT对去卵巢雌兔泪液分泌、血清NO及球后血流动力学的影响目的通过研究激素替代疗法(HRT)对泪液分泌、血清一氧化氮(NO)及球后血流动力学的影响,进一步探讨血流动力学在DE发病机制中的作用。方法1.36只健康成年雌兔随机分为四组,分别为假手术组(F组)、实验对照组(C组)、雌激素治疗组(E组)以及雄激素治疗组(T组),每组9只。F组只打开腹腔,找到卵巢后不做处理,缝合创口。其余三组均进行双侧卵巢切除手术。C组切除卵巢后不做任何处理;E组于切除卵巢后第7天行17-β雌二醇肌注(0.5mg/kg/d),共28天;T组于切除卵巢后第7天行双氢睾酮肌注(4mg/kg/d),共28天。2.分别于术前(D0)、术后第7天(D7)以及激素治疗后第28天(D28)测量兔双眼角膜荧光素染色评分、泪液分泌量(SIt)、泪膜破裂时间(BUT),并行CDFI检查测量OA血流动力学参数,包括PSV、EDV、RI、PI及S/D。并于三个时间点空腹抽取雌兔血液3ml,高速离心取血清后置于-80°C冰箱保存,硝酸还原法统一测量血清NO浓度。3.采用单向方差分析比较不同组别在不同时间点各测值的差异;重复测量的方差分析比较同一组三个时间点各测值的差异。结果1.F组和T组各有1只雌兔因术中麻醉意外死亡。最后各组的实验动物的数量分别为F组8只、C组9只、E2组9只、T组8只,共34只。2.角膜荧光素钠染色结果术前各组实验对象的角膜染色均为阴性。F组D7及D28角膜染色均为阴性。去卵巢后第7天,C组、E组及T组均出现轻度角膜染色,且三组去卵巢动物的角膜染色积分均无明显差异(F=0.106,P=0.900)。D28时间点C组和E组角膜染色均较D7明显加重(t值分别为3.790、5.352;P值分别为0.005、0.001),T组积分则较D7明显减低(t=13.899,P<0.001)。3.SIt检查结果D0时间点各组SIt测值无明显差异(F=0.764,P=0.533)。D7时间点三组去卵巢动物的SIt值无明显差异,但是较F组明显减低(F=4.455,P=0.011)。D28各组间差异显著(F=8.611,P<0.001),其中T组SIt值增高,与F组无明显差异;C、E两组的SIt值则较T组及F组减低。F组D0、D7及D28三个时间点SIt值无明显差异(F=0.016,P=0.984);而C组三个时间点的SIt测值则差异明显(F=66.446,P<0.001),表现为随着时间的推移,SIt值逐渐减低;E组各时间点的SIt测值亦存在明显差异(F=39.198,P<0.001),表现为随着时间的推移,SIt值减低;T组三个时间点的测值差异亦显著(F=24.946,P<0.001),D7的SIt值较D0减低,而补充激素后28天,SIt值增高至术前水平。4.BUT检查结果D0期各组BUT值无明显差异(F=0.571,P=0.638)。D7各组BUT值组间差异显著(F=9.815,P<0.001),其中C、E及T三组的BUT值无明显差异,但是较F组明显减低。D28各组BUT值组间差异显著(F=8.611,P<0.001),F组与T组的BUT值无明显差异,但是大于C组及E组,后两组则无明显差别。重复测量数据的方差结果显示,F组三个时间点BUT值无明显差异(F=0.476,P=0.643);而C组各时间点的BUT值差异明显(F=56.283,P<0.001),表现为随着时间的推移,BUT值逐渐减低;E组各时间点的BUT值亦存在明显差异(F=356.225,P<0.001),表现为随着时间的推移,BUT值逐渐减低;T组各时间点测值的差异亦显著(F=40.140,P<0.001),D7的BUT值较D0减低,而补充激素后28天,BUT值上升至术前水平。5.兔血清NO检测结果D0期各组兔血清NO浓度无明显差异(F=0.051,P=0.984)。D7各组NO浓度组间差异显著(F=9.815,P<0.001),表现为去卵巢的三组动物浓度较F组减低,而三组NO浓度无明显差异。D28时间点E、T两组NO浓度增高,其中E组与F组浓度相近,T组较F组稍低,C组则较其余三组明显减低。重复测量数据的方差分析结果显示,F组三个时间点NO浓度无明显差异(F=0.324,P=0.729);而C组各时间点的NO浓度差异明显(F=64.698,P<0.001),术后7天NO浓度较术前明显减低,而术后28天则无明显改变;E组各时间点的NO浓度亦存在明显差异(F=24.265,P<0.001),术后7天NO浓度较术前明显减低,而补充激素后NO浓度明显增高,与术前无明显差异;T组各时间点测值的差异亦显著(F=20.690,P<0.001),术后7天NO浓度明显减低,而补充激素后28天NO浓度增加,但是仍未上升至术前水平。6.OA各血流动力学参数比较结果去卵巢前各组OA各血流动力学参数均无明显差异,均P>0.05。D7除S/D外各组血流动力学参数均存在明显差异(均P<0.05)。多重比较结果显示,F组的PSV、EDV值均明显大于C、E、T组,而后三组则无明显差别;F组的RI、PI均明显大于C组、E组及T组,而后三组无明显差别。D28除S/D外各组血流动力学参数均存在明显差异(均P<0.05)。多重比较结果显示,F组与T组的PSV、EDV无明显差异,而大于C组及E组;F组与T组的RI值无差异,而小于C组及E组;F组的PI值小于C组及E组,但是大于T组。重复测量的方差分析结果显示,F组各血流动力学参数在三个时间点上均无明显差异,均P>0.05。C组除S/D外其余参数在不同时间点差异明显(P<0.05),两两比较结果显示D0的PSV及EDV均大于D7,而D28则与D7无差异;D0期的RI、PI均小于D7,而D28较D7无明显改变。E组除S/D外其余4个血流参数在三个时间点上差异均有统计学意义(P值均<0.05),两两比较结果显示,D7、D28的PSV及EDV值无差异,但是均较D0明显减低,D7、D28的RI、PI值无明显差异,但是均较D0增高。T组OA的5个血流动力学参数在三个时间点上差异均显著(P值均<0.05)。两两比较结果显示,D0与D28的PSV、EDV值无明显差异,但是高于D7;D0与D28的RI、PI及S/D均无明显差异,但是均较D7减低。提示去卵巢术可导致雌兔OA血流速度减低,血管阻力增高。而补充雌激素则可使OA血流速度进一步减低,血管阻力进一步增高。补充雄激素则相反。结论1.去卵巢术及HRT均对血清NO、泪液分泌及OA血流动力学参数产生不同程度的影响,表明性激素在维持泪液分泌及球后血流动力学的平衡中起着重要的作用;2.NO是性激素调节球后血流动力学的重要因素;2.血流动力学改变与DE的发生发展存在一定的关联。