姜黄素对大鼠肝脏原代细胞中apoB基因(C-U)mRNA编辑效率的影响

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaokexiaoai1314
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目的:使用细胞生物学、分子生物学及生物化学等相关技术探讨姜黄素对SD大鼠肝原代细胞中APOBEC-1的mRNA及蛋白水平,apoB(C-U)mRNA编辑的影响,探讨姜黄素抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:原代培养SD大鼠肝原代细胞,糖原染色鉴定培养的SD大鼠肝原代细胞的纯度,MTT实验确定姜黄素的最佳作用浓度。细胞设为对照组(0 μmol/L),姜黄素低剂量组(5μmol/L),姜黄素中剂量组(15 μmol/L)和姜黄素高剂量组(25 μmol/L),并以相应浓度的姜黄素处理细胞24 h。对细胞提取RNA和蛋白后,Western-Blot检测姜黄素对APOBEC-1蛋白的表达,real-time PCR检测姜黄素对APOBEC-1的mRNA的表达,并以大鼠肝脏组织为对照,通过RT-PCR及克隆测序检测姜黄素对大鼠肝脏原代细胞apoB(C-U)mRNA编辑效率的影响。结果:①糖原染色结果显示原代培养所得的细胞90%以上为肝细胞。②MTT实验结果显示姜黄素的浓度在小于70 μmo l/L的范围时,药物作用24h后对大鼠肝原代细胞的生长增殖无明显的影响。③细胞经姜黄素处理后,中剂量姜黄素(15 μmol/L)显著增加APOBEC-1的mRNA和蛋白的表达。④姜黄素对apoB(C-U)mRNA编辑效率的影响与其对APOBEC-1的表达影响趋势一致。结论:中剂量姜黄素(15 μmol/L)能增加APOBEC-1的mRNA和蛋白上的表达,APOBEC-1以胞嘧啶脱氨基酶的功能提高apoB mRNA(C-U)编辑效率,使得apoB48的编辑量增加,apoB100的编辑量减少。apoB48比apoB100以更快的速度将LDLs从血浆中清除出去,同时能导致动脉粥样硬化的LP(a)合成减少,从而姜黄素能发挥抗动脉粥样硬化的作用。
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