【摘 要】
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本研究利用EMS诱变处理四川小麦品种蜀麦126,创制了包含10600个M2代单株的诱变群体。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对该群体部分材料Wx蛋白变异进行鉴定,发现了一个Wx-A1蛋白缺失的
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本研究利用EMS诱变处理四川小麦品种蜀麦126,创制了包含10600个M2代单株的诱变群体。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对该群体部分材料Wx蛋白变异进行鉴定,发现了一个Wx-A1蛋白缺失的突变体M2-31。通过基因克隆等方法,揭示了Wx-A1蛋白缺失的分子机制,并通过淀粉含量测定、淀粉颗粒结构扫描等方法探究该突变对淀粉品质的影响。主要结果如下:1、对蜀麦126和M2-31突变体Wx-A1基因的完整编码区进行克隆。通过序列分析发现,在相对于起始密码子下游2168bp的位置发生了G到A的单碱基突变,该突变刚好发生在第8个内含子的剪接供体位点。2、由于SNP没有发生在M2-31的Wx-A1基因外显子区域,而是发生在mRNA剪接位点,我们研究了M2-31的Wx-A1基因的转录本,总共对52个cDNA的单克隆进行测序。结果发现,M2-31的cDNA全部发生了错误剪辑,总共产生了五种错误剪辑的cDNA类型,外显子的缺失和内含子的保留是错误剪辑的主要特征。3、对蜀麦126和M2-31突变体淀粉含量进行测定,结果发现Wx-A1的缺失导致M2-31中总淀粉和直链淀粉含量显著降低。对淀粉颗粒结构的扫描发现,突变体M2-31淀粉颗粒与蛋白质基质结合紧密,具有硬质小麦的特征。通过测定小麦种子的硬度指数,发现M2-31的硬度指数显著高于蜀麦126。4、对控制种子硬度的主效基因Pina-D1和Pinb-D1研究发现,蜀麦126和M2-31中Pina-D1基因型均为常见缺失类型Pina-D1b,而Pinb-D1序列无差异均为Pinb-D1a,但M2-31中Pinb-D1的表达量明显低于蜀麦126,这可能与种子硬度增加相关。
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