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研究目的:探究RNA氧化与线虫生命周期的相关性。研究内容:研究线虫NDX-4蛋白的体外酶学活性;建立RNA氧化水平增加的线虫模型;观察RNA氧化水平增加后线虫生命周期的改变,初步探讨可能机制。研究方法:体外表达NDX-4,采用HPLC-UV技术检测其对8-oxodGTP和8-oxoGTP的酶学活性;对NDX-4基因缺陷线虫进行不同浓度的外源性底物刺激,采用质谱技术检测RNA氧化水平,以RNA中8-oxoG含量(每106个G中的个数)表示,建立RNA氧化水平增加的线虫模型;以KHB处理组为对照,观察外源性底物刺激后线虫生命周期的改变;采用质谱技术分别检测加压后不同时间点0.5、1、2、4、8、12、16、20小时线虫体内的RNA氧化水平,观察外源性底物刺激后线虫体内RNA氧化碱基代谢规律;建立检测let-363表达的Real-time RT-PCR体系,并采用Real-time RT-PCR技术,以KHB为对照,计算2-ΔΔCt值,检测加压后let-363基因随时间的表达规律。研究成果:HPLC-UV检测显示NDX-4蛋白能将8-oxodGTP和8-oxoGTP酶解为相应的单磷酸和二磷酸形式;成功构建RNA氧化水平增加的线虫模型;与对照相比,RNA氧化水平增加的线虫生命周期缩短;观察外源性底物刺激后线虫体内RNA氧化碱基代谢规律:氧化加压后4小时氧化碱基达最高水平,其后逐渐降低,8小时恢复至对照组水平;RNA氧化水平增加后,线虫let-363mRNA含量改变。结论:线虫NDX-4蛋白对8-oxodGTP和8-oxoGTP均具有酶学活性;线虫体内RNA氧化水平增加后,其生命周期缩短;线虫体内RNA氧化水平增加引起let-363表达变化,是否与线虫生命周期缩短相关需要进一步实验验证。