牛病毒性腹泻／黏膜病(Bovine viral diarrhea-mucosal disease, BVD-MD)是由牛病毒性腹泻／粘膜病病毒(BVDV)引发的牛的一种传染病。该病主要发生于牛,犊牛更易感,还可感染其它动物,主要引起牛腹泻,急、慢性粘膜病,持续性感染与免疫耐受,母畜流产和死胎等,给养牛业的经济造成严重的损失。为了调查宁夏地区牛病毒性腹泻/粘膜病的流行病学及分子流行病学情况,掌握该病在宁夏地区的流行状况,本试验运用ELISA方法对宁夏BVDV的感染及流行情况进行调查。并在此基础上对血清学阳性牛进行分子生物学跟踪检测,以获得BVDV地方分离株。本研究对送到实验室检测的326份血清样品和278份耳组织样品,运用BVDV抗体ELISA检测试剂盒对血清样品进行抗体检测,对耳组织样品使用BVDV抗原ELISA检测试剂盒进行抗原检测。对送检样品BVDV血清学的研究。检测结果显示,326份血清样品的BVDV抗体阳性率为90.2%,278份耳组织样品的BVDV抗原阳性率为0.3%。检测结果表明宁夏地区送检的样品中BVDV抗体阳性率很高,可能是因为送检的都是具有腹泻、流产等症状的样品有关。利用细胞培养技术对诊断出的抗原阳牛进行病毒分离,并顺利获得牛病毒性腹泻病毒分离株,命名为BVDV-NX。该分离株在MDBK细胞系上进行增殖培养,出现空斑、拉网和脱落等一系列典型的细胞病变(CPE)。随后收集病毒液,提取病毒总RNA并经反转录获得BVDV-NX毒株cDNA.利用PCR方法对5’-UTR基因片段进行扩增和测序,应用MEGA6分析软件,选择N-J(Neighbor-Joining)方法绘制遗传进化树,这株BVDV-NX属于BVDV基因1b型。根据NCBI上已发表的BVDV-EO基因序列设计一对特异性引物,利用PCR方法扩增出710bp的E0基因,进行测序及序列分析。将PCR扩增的E0基因克隆入原核表达载体pET-32a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行双酶切鉴定,构建原核表达载体pET-32a-E0,为进一步的试验奠定基础。