雷公藤(Tripterginum Wilfordii Hook．F)属多年生卫矛科植物，其提取物具有免疫抑制、抗炎、抗肿瘤、抗生育等广泛作用，可有效地治疗许多自身免疫疾病，例如类风湿性关节炎，免疫性肾炎以及系统性红斑狼疮等等。雷公藤内酯醇是雷公藤中具有主要活性的二萜类化合物，抗炎、抗肿瘤、抗生育及免疫抑制作用显著。研究表明其对T细胞、B细胞、单核细胞、肿瘤细胞等都具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。近年来在实验及临床中，发现其在器官移植抗排斥反应方面具有广阔的应用前景。由于其显著的疗效，雷公藤内酯醇受到国内外学者的日益关注，对其进行了各方面的研究，尤其是在免疫抑制和抗肿瘤方面，取得了很大进展。 迄今为止，已有许多triptolide的免疫抑制作用机理相关报道，基本可以总结为可能是通过抑制NF—κB和purine—box调节因子NF—AT的转录激活而抑制IL-2基因转录，并抑制其它一些细胞因子的产生，从而抑制T细胞的活化增殖。同时由于雷公藤内酯醇能够抑制树突细胞的成熟分化，抑制巨噬细胞分泌细胞因子，等等。因此进一步对免疫系统的激活产生抑制。 然而，很明显大多数研究中所使用的细胞材料都是一些免疫细胞株，不能完整、准确的反映出生理状态下正常免疫细胞对雷公藤内酯醇作用的应答。本研究采用小鼠淋巴结T细胞作为研究对象，以anti—CD3+anti—CD28进行刺激活化，并且由TCR/CD3刺激所引发的信号转导通路清晰明确，因此这为研究triptolide的免疫抑制机理提供了一个良好的平台。 CFSE染色分析结果表明triptolide明显抑制T细胞的增殖，而通过检测细胞周期，发现triptolide阻碍T细胞从GO/G1期进入S+G2/M期。并且分析了其对T细胞激活过程中的早期活化标志CD69以及各类细胞因子表达的影响，结果显示对于CD69以及IL-2、IFN—γ等，triptolide具有显著抑制作用，而对于TNF—α却没有作用。通过分别加入多种信号通路的阻断剂，与triptolide对CD69以及细胞因子所产生的抑制效果进行比较，我们发现转录因子AP-1以及MAPKinaseJNK在triptolide的免疫抑制作用中占有重要地位，而NF—AT、ERK通路在其中所起到的作用相比较而言要小许多。通过不同信号传导通途抑制剂对TNF—α表达抑制作用的分析，发现PKC发挥着重要作用，而triptolide却没有太多抑制效果，可以表明triptolide的抑制作用与其无关。 进而对AP-1上游的MAPK信号通路进行了研究，提出了一条triptolide发挥抑制作用的信号通路假设，即：Lck→Zap70→Vavl→JNK→c—Jun→AP-1→效应基因。并且通过对其中一些基因RT—PCR的验证，发现它们的mRNA水平在加入triptolide后显著降低，表明triptolide对这些蛋白的抑制作用很有可能是在转录水平上产生的。 近年来基因芯片以及二维电泳—质谱联用技术在生命科学研究领域得到广泛的应用，对探讨药物作用机理，找出药物作用靶点的研究而言，它们是非常有效的重要工具。我们通过基因芯片及二维电泳的检测、比较，得到了许多有意义的数据，同时也验证了许多之前我们的实验结果，并为进一步研究triptolide的免疫抑制机理奠定了良好的基础。