苹果树腐烂病菌2个Zn(Ⅱ)2Cys6类转录因子的基因功能初步研究

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作为真菌类病害的苹果树腐烂病,是一种由黑腐皮壳属真菌引起的、严重的枝干皮层的腐烂性病害(Wang et al.2014)。苹果树腐烂病在我国的分布范围比较广。苹果树腐烂病危害严重时会造成减产和果品质量降低,严重威胁了我国苹果产业。目前,其致病机理还不是很清楚,在苹果的生产上还没有形成一套非常有效的防控体系,也没有形成效果好、对环境友好的防治方法。因此,深入解析苹果树腐烂病菌的致病机理,对揭示其发展规律,保障我国苹果的安全生产,具有非常大的意义。Zn(Ⅱ)2Cys6类转录因子只在真菌中存在,参与真菌的生命活动过程。本试验从本实验室已利用生物信息学分析预测出的苹果树腐烂病菌的2个上调表达的Zn(Ⅱ)2Cys6类转录因子Vmtf266、Vmtf1026为基础,通过基因敲除、突变体表型分析等试验,初步明确了这2个Zn(Ⅱ)2Cys6类转录因子与苹果树腐烂病菌生长发育及致病性的关系,取得的主要结果如下:1.利用Double-joint PCR、PEG介导的原生质体遗传转化,通过PCR检测,Vmtf266、Vmtf1026分别获得了6个、10个阳性突变体,进行Southern blot验证后,共得到了ΔVmtf266-19、ΔVmtf1026-31两个单拷贝敲除突变体。2.对敲除突变体进行表型观察、抗盐离子胁迫试验及致病力测定发现,与野生型03-8相比,Vmtf266、Vmtf1026的菌落大小均显著减少,产孢量无显著差异,Vmtf266、Vmtf1026致病力均显著小于野生型均株03-8,Vmtf 266对K+胁迫敏感,Vmtf266、Vmtf1026对Na+胁迫敏感。本研究说明基因Vmtf 266、Vmtf1026与苹果树腐烂病菌的生长和发育、致病性相关,且均参与苹果树腐烂病菌盐离子胁迫应答。
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