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目的:研究虎杖蒽醌对类风湿关节炎大鼠TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达的影响;完善中药虎杖干预类风湿关节炎作用机制;为临床研究虎杖蒽醌干预类风湿关节炎提供理论和一定实验基础。
方法:SPF级Wistar大鼠60只,随机分成正常组、模型组、地塞米松组、虎杖蒽醌高剂量组、虎杖蒽醌中剂量组和虎杖蒽醌低剂量组,除正常组外其余五组用牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂等量乳化剂进行造模。用两相酸水解法提取虎杖蒽醌类化合物,并用高效液相对提取物虎杖蒽醌进行质量标准测定。以虎杖蒽醌高剂量80mg·kg-1,虎杖蒽醌中剂量40mg·kg-1,虎杖蒽醌低剂量20mg·kg-1,地塞米松7.5mg·kg-1每日一次进行灌胃,连续进行20d;正常组不做任何处理,正常饲养;用生理盐水对模型组每日一次进行灌胃,连续进行20d。在造模14d,造模第20d,用药第20d分别对大鼠足爪进行测量、拍照和X射线观察,并于用药第20d取大鼠血清、脾脏、滑膜;每日观察大鼠足爪变化,于造模14d,造模20d和用药20d测量大鼠足跖厚度,进行分析;用Elisa法检测RA大鼠血清TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达变化;用HE染色法检测大鼠关节滑膜细胞的变化情况;用免疫组化法检测大鼠滑膜组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达变化情况;用Western blot法检测脾脏组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达变化;利用PCR法测定大鼠脾脏组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9mRNA表达变化情况。
结果:足跖厚度和其图片及X射线结果表明模型组大鼠足爪出现严重肿胀和溶骨现象,并有不连续低密度影,正常组大鼠足爪部没有肿胀、低密度影和溶骨现象;虎杖蒽醌低剂量组也有一定溶骨现象和低密度影,而虎杖蒽醌高剂量组、虎杖蒽醌中剂量组和地塞米松组大鼠足爪部溶骨及低密度影不明显。与模型组比较其余各组血清中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9的表达显著降低(P<0.01)。HE染色结果显示与模型组比较其余各组大鼠滑膜组织中有大量炎性细胞表达。免疫组化结果说明与模型组比较,正常组大鼠滑膜组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达极少(P<0.01),同时其余各用药组也有显著下调(P<0.01)。Western blot检测结果表明,与模型组比较正常组脾组织TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达极少(P<0.01),虎杖蒽醌高剂量组、虎杖蒽醌中剂量组及地塞米松组脾组织TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达显著下调(P<0.01)。用PCR检测大鼠脾脏组织目的mRNA发现模型组大鼠滑膜组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9mRNA的表达显著高于正常组及各用药组(P<0.01);
结论:虎杖蒽醌可在蛋白层面干预类风湿关节炎大鼠血清、滑膜组织及脾组织中炎症因子TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达,并且与临床用药地塞米松作用相近,缓解类风湿关节炎大鼠跛行、消瘦、精神萎靡、食欲不振等症状。虎杖蒽醌能还可以在mRNA层面降低脾组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达。可进一步阐明虎杖蒽醌干预类风湿关节炎相关机制,为虎杖蒽醌深入研究提供一定实验依据。
方法:SPF级Wistar大鼠60只,随机分成正常组、模型组、地塞米松组、虎杖蒽醌高剂量组、虎杖蒽醌中剂量组和虎杖蒽醌低剂量组,除正常组外其余五组用牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂等量乳化剂进行造模。用两相酸水解法提取虎杖蒽醌类化合物,并用高效液相对提取物虎杖蒽醌进行质量标准测定。以虎杖蒽醌高剂量80mg·kg-1,虎杖蒽醌中剂量40mg·kg-1,虎杖蒽醌低剂量20mg·kg-1,地塞米松7.5mg·kg-1每日一次进行灌胃,连续进行20d;正常组不做任何处理,正常饲养;用生理盐水对模型组每日一次进行灌胃,连续进行20d。在造模14d,造模第20d,用药第20d分别对大鼠足爪进行测量、拍照和X射线观察,并于用药第20d取大鼠血清、脾脏、滑膜;每日观察大鼠足爪变化,于造模14d,造模20d和用药20d测量大鼠足跖厚度,进行分析;用Elisa法检测RA大鼠血清TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达变化;用HE染色法检测大鼠关节滑膜细胞的变化情况;用免疫组化法检测大鼠滑膜组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达变化情况;用Western blot法检测脾脏组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达变化;利用PCR法测定大鼠脾脏组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9mRNA表达变化情况。
结果:足跖厚度和其图片及X射线结果表明模型组大鼠足爪出现严重肿胀和溶骨现象,并有不连续低密度影,正常组大鼠足爪部没有肿胀、低密度影和溶骨现象;虎杖蒽醌低剂量组也有一定溶骨现象和低密度影,而虎杖蒽醌高剂量组、虎杖蒽醌中剂量组和地塞米松组大鼠足爪部溶骨及低密度影不明显。与模型组比较其余各组血清中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9的表达显著降低(P<0.01)。HE染色结果显示与模型组比较其余各组大鼠滑膜组织中有大量炎性细胞表达。免疫组化结果说明与模型组比较,正常组大鼠滑膜组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达极少(P<0.01),同时其余各用药组也有显著下调(P<0.01)。Western blot检测结果表明,与模型组比较正常组脾组织TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达极少(P<0.01),虎杖蒽醌高剂量组、虎杖蒽醌中剂量组及地塞米松组脾组织TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9蛋白表达显著下调(P<0.01)。用PCR检测大鼠脾脏组织目的mRNA发现模型组大鼠滑膜组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9mRNA的表达显著高于正常组及各用药组(P<0.01);
结论:虎杖蒽醌可在蛋白层面干预类风湿关节炎大鼠血清、滑膜组织及脾组织中炎症因子TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达,并且与临床用药地塞米松作用相近,缓解类风湿关节炎大鼠跛行、消瘦、精神萎靡、食欲不振等症状。虎杖蒽醌能还可以在mRNA层面降低脾组织中TNF-α、HIF-1α、MMP2和MMP9表达。可进一步阐明虎杖蒽醌干预类风湿关节炎相关机制,为虎杖蒽醌深入研究提供一定实验依据。