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随着生活水平的提高,人们对美的追求也越来越高,皮肤光老化问题也日益受到人们的广泛关注。胶原蛋白肽被广泛认可具有改善皮肤光老化的功效,但是目前主要集中于胶原蛋白酶解物的活性评价以及胶原蛋白肽的分离鉴定,但是关于胶原蛋白肽的高效筛选以及定向制备方面的研究较少。因此,本课题以深海鳕鱼皮为原料,以光损伤的成纤维细胞为模型,考察不同条件下酶解制备的胶原蛋白肽的抗皮肤光老化活性差异,并结合肽组学和peptide ranker等分析软件,快速筛选出潜在具有抗光老化活性的胶原蛋白多肽,在此基础上探究其保护成纤维细胞光损伤的作用机理,最后确定了定向制备高含量活性肽的鳕鱼皮胶原蛋白肽的酶解工艺。本课题主要结果和结论如下:（1）分别采用酸性、中性、碱性蛋白酶制备不同水解度的鳕鱼皮酶解物,对比分析了它们的蛋白质回收率、水解度以及光损伤成纤维细胞的修复活性,结果发现碱性蛋白酶酶解5 h下的鳕鱼皮酶解液水解效果最佳,其回收率和水解度达85.6%和20.55%;胶原酶抑制活性和光损伤成纤维细胞的细胞存活率也均为最高,分别为66.99%、73.56%,并且3种蛋白酶制备的酶解液的酶解效率和抗光老化活性都随着酶解时间的增加而增大。综合分析它们的分子量分布、氨基酸组成、肽组成发现,鳕鱼皮碱性蛋白酶水解物与其它两种酶的酶解物在肽组成和含量方面存在明显差异,进一步结合质谱分析、PCA分析手段,筛选出了7条具有潜在抗光老化活性的胶原蛋白多肽序列,它们分别为GPA、GPL、GX（X表示羟脯氨酸）、GL、GPPGPTGA、AGPAGPR和GY。（2）采用光损伤成纤维细胞模型评价了GPA、GPL、GX、GL、GPPGPTGA、GY等6条胶原肽的抗皮肤光老化活性,并从氧化应激、ECM流失、细胞凋亡三方面着手研究了这些胶原肽对光损伤成纤维细胞细胞的保护作用机理。结果发现,这6条肽均能显著提升光损伤成纤维细胞的存活率（p<0.5）,其中GPPGPTGA活性最好,其次为GX,然后是GPA,再是GY,而后是GPL,最后是GL。此外,这6条胶原肽均能够不同程度地抑制ROS产生、提升SOD活性、抑制胶原酶的产生、降低胶原蛋白的含量、抑制Ca2+离子内流和改善线粒体膜电位（MMP）流失。其中GPPGPTGA在这6个方面作用效果最佳,这可能是其抗光老化活性最好的原因。（3）以蛋白质水解度和回收率为指标,结合目标肽相对含量和光损伤成纤维细胞的修复活性,优化了鳕鱼皮定向酶解工艺。结果显示,在筛选的6种蛋白酶中,胰酶制备的鳕鱼皮胶原肽的蛋白回收率和水解度最高,小分子肽段含量最高,抗光老化目标肽GPPGPTGA、GX相对含量最高;进一步优化其最佳工艺条件为酶添加量在0.4%（w/w相对于鱼皮）,p H为9,酶解5 h。该条件下制备的鳕鱼皮胶原肽的蛋白回收率和水解度分别为87.89%和27.11%;相对于商品的胶原蛋白肽来说,GPPGPTGA的相对含量为478.23%,GX的相对含量为1167.84%,GPA的相对含量为527.47%;小于3 k Da的肽段组分达到了98.78%,且从细胞形态学观察实验和细胞存活率实验结果来看其抗光老化效果显著。