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视黄醇及其代谢产物是雄性动物睾丸发育和精子发生所必需的物质。支持细胞是睾丸内视黄醇作用的靶细胞,为生精细胞发育和成熟提供特有的微环境。本试验以分离自3-5周龄仔猪睾丸的支持细胞为材料,采用RT-PCR、CCK-8、ELISA检测支持细胞内增殖和凋亡相关基因、细胞因子的表达,分析视黄醇对仔猪睾丸支持细胞增殖、凋亡和表达细胞因子的影响,获得如下结果：1仔猪支持细胞的分离培养和鉴定经比较3组酶消化法所获得细胞数量、细胞活率和GATA-4 mRNA相对表达量,结果显示,先以0.25%胶原酶IV和0.1%透明质酸酶,37°C消化60 min,再以0.25%胰酶和0.1%DNase I,37°C消化20 min,有利于支持细胞的富集。于贴壁不同时间收集细胞,分析悬浮细胞和贴壁细胞中GATA-4 mRNA相对表达量,结果显示,支持细胞在2h内不贴壁,贴壁时间主要分布在3-5 h。采用差异贴壁和低渗处理后纯化细胞,形态不规则,胞体宽大,细胞核呈卵圆或不规则形；GATA4染色呈阳性,碱性磷酸酶染色呈阴性；RT-PCR检测结果显示,纯化后细胞表达支持细胞标记GATA4、 SOX9、INHB,不表达间质细胞标记CYP17、3β-HSD和管周细胞标记α-SMA,符合支持细胞的蓦本特征；经ELISA检测显示,本试验所分离支持细胞表达GDNF、LIF、 CSF-1、FGF2、EGF,而SCF未检出。2视黄醇对支持细胞增殖和凋亡的影响分别在培养基中添加0.005 μmol/L、0.025 μmol/L、0.125 μmol/L、0.625μmol/L、 1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L视黄醇,短期培养(24 h)和长期培养(3d)后,经CCK-8检测支持细胞活性,结果如下：培养24h,视黄醇浓度低于5μmol/L,对支持细胞的活性没有显著影响,而浓度达到5μmol/L显著抑制支持细胞活性,表明5μmol/L及以上浓度的视黄醇对支持细胞具有显著的细胞毒性效应；培养3d,视黄醇浓度低于为0.005μmol/L和0.025μmol/L时对支持细胞活性无显著影响,视黄醇浓度为0.125μmol/L和0.625μmol/L时显著抑制支持细胞活性(P<0.05),浓度达到1.25μmol/L时表现极显著抑制(P<0.01)。短期培养和长期培养结果显示,视黄醇的作用具有时效性和剂量依赖性。实验选取1.25 μmol/L作为视黄醇的试验浓度,应用RT-PCR检测分析视黄醇对细胞增殖(PCNA、C-MYC和BCL-2)和凋亡相关基因(CASP3和BAX)表达的影响,结果显示：视黄醇组增殖相关基因的表达量显著低于对照组,凋亡相关基因的表达量显著高于对照组。结果表明视黄醇通过抑制支持细胞内增殖相关基因表达,促进凋亡相关基因表达,进而抑制支持细胞增殖。3视黄醇对支持细胞分泌细胞因子的影响在培养基中添加1.25 μmol/L视黄醇,应用RT-PCR分析和ELISA检测分析视黄醇对支持细胞表达细胞因子的影响,RT-PCR分析显示,视黄醇显著抑制支持细胞内GDNF、CSF-1和EGF mRNA表达,对LIF和FGF2 mRNA表达没有显著影响；经ELISA检测,视黄醇显著抑制支持细胞中GDNF、LIF、CSF-1、FGF2、EGF蛋白的表达。综上所述,视黄醇具有抑制支持细胞内增殖相关基因表达,促进凋亡相关基因表达,和抑制支持细胞合成和分泌细胞因子的作用,进而降低支持细胞活性,抑制支持细胞增殖。