新城疫（Newcastle disease,ND）是全球最严重的禽类传染病之一,对世界许多国家的禽类养殖产业造成了巨大影响。导致ND的病原体是新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）,其是一类具有囊膜、不分节段的单股负链RNA病毒。研究发现,干扰素（Interferon,IFN）对NDV有一定的拮抗作用,NDV的V蛋白可以拮抗宿主IFN信号通路介导的先天免疫反应,但具体机制尚不清楚。为探究细胞感染过程中NDV弱毒株和强毒株V蛋白对病毒的复制、IFN拮抗作用以及细胞凋亡的影响,本研究分别构建了表达弱毒株和强毒株V蛋白的真核表达质粒LA-V和HB-V,并对插入外源V蛋白的重组病毒r L-LA和r L-HB的感染效率进行了评价及验证。随后测定了重组病毒r L-LA和r L-HB的先天性免疫水平,主要包括干扰素通路关键蛋白P-STAT1和MDA5的表达水平,IFN-β的生成水平,IFN下游抗病毒蛋白2’5’-OAS、MX1、PKR及IFN通路中多种先天性免疫分子的转录水平。最后检测了病毒感染后细胞的凋亡水平,膜融合及核碎裂情况,caspase 3的裂解水平。具体试验结果如下:1.病毒感染效率的检测及验证:本试验在测定重组病毒生长滴度、NP蛋白转录水平及不同时间感染效率的基础上,对构建的LA-V和HB-V真核表达质粒中V蛋白表达水平和感染细胞的能力进行了检测及验证。试验结果显示,重组病毒LA-V和HB-V的生长滴度均高于亲本毒r L,外源V蛋白的插入能够在病毒感染中发挥作用,促进病毒的增殖与复制。本试验同时发现,LA-V的感染效率要高于HB-V,但都具有促进复制的能力,弱毒株V蛋白结合细胞的程度相比强毒株V蛋白要高。2.病毒先天性免疫水平的测定:先天性免疫水平测定结果显示,r L-LA的PSTAT1和MDA5表达水平低于r L和r L-HB,r L-LA对IFN-β生成的抑制作用更为明显。同时其IFN下游关键的抗病毒蛋白和多种先天性免疫分子的转录水平也均低于r L-HB,r L-LA拮抗干扰素的能力强于r L-HB,并能在细胞内长时间复制。该试验结果说明,V蛋白可能在病毒免疫逃避机制中扮演重要角色,V蛋白的插入能够在一定程度上抑制免疫分子的转录水平,降低抗病毒效应,使细胞无法发挥抗病毒的作用。3.病毒感染后细胞凋亡水平的检测:本试验检测了病毒感染后细胞的膜融合情况、DF1和A549细胞被感染后的凋亡水平和细胞核碎裂情况及凋亡蛋白（caspase 3）的裂解水平。试验结果显示,加胰酶处理后,亲本毒r L未能引起细胞融合,而重组病毒在24 h就可观察到细胞融合,即使不加胰酶,重组病毒仍能在48 h诱导细胞融合。经Hoechst染色,r L-HB感染组细胞数量最少且细胞核碎裂最明显。病毒感染后,caspase 3裂解水平上升,r L-HB感染24 h时caspase 3裂解蛋白水平最高。本试验结果表明,r L-HB引起细胞凋亡水平高于r L-LA,r LLA感染效率高于r L-HB,弱毒V蛋白对病毒的复制和增殖更有利。综上所述,V蛋白对病毒复制增殖具有促进作用,并可影响IFN早期的生成,同时推测V蛋白在病毒感染过程中具有辅助F蛋白促进细胞融合的功能。本试验研究结果将为NDV强毒株和弱毒株的致病机制提供参考,对NDV及其它相似病毒致病机制的深入探究具有重要意义。