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目的:观察南美响尾蛇神经毒素(crotoxin,Cr TX)对人大细胞肺癌细胞体外培养抗肿瘤作用,以及对人大细胞肺癌细胞裸鼠移植瘤抗肿瘤作用,并探讨其相关作用机制。方法:通过四唑盐还原法(CCK-8)检测南美响尾蛇神经毒素(crotoxin)、吉非替尼(Gefinitib)及两药联合应用对人大细胞肺癌NCI-H661细胞的生长抑制率,应用细胞集落平板克隆实验观察crotoxin、gefinitib及两药联合应用对NCI-H661细胞的集落形成的影响;应用流式细胞术检测crotoxin、gefinitib及两药联合应用对NCI-H661细胞周期及细胞凋亡率的影响,并检测以SB203580抑制p38活性,以PFT-α抑制wtp53的活性后NCI-H661细胞周期及细胞凋亡率的变化;应用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定crotoxin、gefinitib及两药联用对NCI-H661细胞内p38MAPK、wtp53、phospho-p38MAPK、bax、bcl-2及caspase-3活性亚单位p17蛋白表达水平影响,并测定以SB203580抑制p38活性,以PFT-α抑制wtp53的活性后crotoxin、gefinitib及两药联合应用对NCI-H661细胞内以上6种蛋白表达水平变化。将人大细胞肺癌NCI-H661细胞接种裸鼠腋下建立荷瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分为6组,crotoxin组、gefinitib组、crotoxin+gefiniti组、crotoxin+SB203580组、crotoxin+PFT-α组和阴性对照组。实验组裸鼠腹腔注射给药,每三天给药一次,同时阴性对照组注射等量生理盐水。给药4周后完整取出皮下移植瘤结节,对比较不同干预组和对照组移植瘤瘤重,计算抑瘤率。结果:Crotoxin对NCI-H661细胞有生长抑制作用,与gefinitib联用可增强gefinitib抗肿瘤效果,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Crotoxin对NCI-H661细胞集落形成有抑制作用,与gefinitib联用可增强gefinitib对NCI-H661细胞集落形成抑制效果,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Crotoxin对人大细胞肺癌NCI-H661细胞有诱导凋亡和细胞周期G1期阻滞作用,且crotoxin与gefinitib联用可增强gefinitib对NCI-H661细胞诱导凋亡和细胞周期G1期阻滞作用,以SB203580抑制p38活性,以PFT-α抑制wtp53的活性后,crotoxin诱导凋亡和细胞周期G1期阻滞作用可被抑制。Western blot实验中crotoxin、gefinitib、crotoxin+gefinitib组中phospho-P38MAPK、wt P53、caspase3活性亚单位P17、bax蛋白表达水平与对照组相比表达增高,且crotoxin、gefinitib组表达量接近,Crotoxin+Gefinitib组高于前两者;bcl-2蛋白表达水平较对照组下调,且crotoxin+gefinitib组低于crotoxin、gefinitib组,差异有统计学意义。crotoxin+SB203580组中phospho-P38MAPK、wt P53、caspase3活性亚单位P17、bax、bcl-2蛋白表达水平与对照组相接近,差异无统计学意义。Crotoxin+PFT-α组中phospho-P38MAPK、wt P53蛋白表达水平比对照组高,差异有统计学意义;caspase3活性亚单位P17、bax、bcl-2蛋白表达水平与对照组无明显变化,差异无统计学意义。各组中p38MAPK蛋白表达水平接近对照组,无统计学差异。Crotoxin,gefinitib均对人大细胞肺癌NCI-H661细胞移植瘤生长有抑制作用,二者联合应用可显著提高抑瘤作用,其抑瘤率分别是39.5%、43.7%及75.1%,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Crotoxin对人大细胞肺癌NCI-H661细胞体外生长有抑制作用,与gefinitib联用可增强gefinitib抗肿瘤效果,其作用与诱导凋亡和G1期阻滞有关,其中诱导凋亡作用可能和激活P38MAPK信号转导通路进而活化caspase3有关,G1期阻滞可能由胞内wt P53蛋白表达上调所致。Crotoxin对人大细胞肺癌NCI-H661细胞移植瘤生长有抑制作用,且crotoxin可增强gefinitib对人大细胞肺癌NCI-H661细胞裸鼠移植瘤抑制作用。