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目的胆管癌是较常见的肝胆肿瘤。流行病学调查结果显示,近年胆管癌的发病率有增加的趋势。胆管癌临床上起病隐匿,症状出现较晚,早期诊断困难,大多数病例确诊时已属晚期,手术根治率低、预后差。因此,深入研究胆管癌的发病机制,对于提高胆管癌的诊治具有十分重要的意义。现代分子生物学研究证明,恶性肿瘤的发生发展不仅与肿瘤细胞异常增殖和分化有关,而且与细胞凋亡受抑制、凋亡不足也有关,凋亡调节紊乱是恶性肿瘤形成的重要机制之一。于是,细胞凋亡与癌变的关系引起人们的广泛注意,成为目前分子细胞生物学一个新的研究热点。Livin是近年发现的一个凋亡抑制蛋白,不但具有抑制细胞凋亡的功能,而且其表达具有明显的组织特异性,已发现在多数肿瘤中表达,与肿瘤发生有密切关系,可能作为诱导肿瘤凋亡治疗的新靶点；Caspase家族是一类在氨基酸序列、空间结构及底物特异性方面都具有相似性的特异性天冬氨酸-半胱氨酸蛋白酶。细胞凋亡的发生就是一个复杂的,由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程,而位于其下游区的效应子Caspase-3的激活则被认为是该级联反应的必经之路。Livin主要通过其BIR区与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspases)结合,直接抑制半胱氨酸蛋白酶Caspases,尤其是抑制Caspase-3/-7和Caspase-9的活性,达到阻断凋亡受体及线粒体相关的凋亡途径,而实现对细胞凋亡的抑制作用。本实验研究Livin及Caspase-3在胆管癌组织中的表达情况,探讨Livin及Caspase-3的表达情况与胆管癌生物学行为的关系；并对胆管癌组织中两者的相关性进行初步研究,进一步探讨Livin及Caspase-3对胆管癌发生、发展的影响,揭示胆管癌的发病机制：为胆管癌的诊断及治疗寻求一个可能的新的靶点。方法收集中国医科大学附属第一医院普通外科于2002年1月-2008年12月期间手术切除、病理证实为胆管癌的标本56例。癌旁胆管组织取自27例根治性切除的标本,经病理证实无癌细胞。用免疫组织化学方法检测Livin和Caspase-3的表达情况。应用SPSS13.0统计软件对结果进行分析。对两项指标的检测数据分别进行x2检验及Spearman等级相关检验,以P<0.05为差异有统计学意义。判定两者的表达与胆管癌各临床病理学指标之间的关系,以及两者的表达有无相关性。结果1、Livin在胆管癌及癌旁胆管组织中的表达在56例胆管癌组织中Livin阳性表达率为58.93%(33／56),对照组癌旁胆管组织27例中Livin表达皆为阴性,进行卡方检验分析两组阳性率差别有统计学意义(x2=26.094,P<0.05)(见表1)。把胆管癌组织分为男、女两组,Livin阳性率分别为52.94%(18／34)和68.18%(15／22),两者比较差异无显著性(x2=1.259,P>0.05)。依胆管癌分化程度分为高、中、低分化组,Livin阳性率依次为37.93%(11／29)、76.92%(10／13)、85.71%(12／14),三者比较差异有显著性(x2=10.793,P<0.05)。淋巴结转移组Livin阳性率为61.29%(19／31),淋巴结无转移组Livin阳性率56.00%(14／25),两者比较差异无显著性(x2=0.157,P>0.05)。在胆管癌TNM分期中,Ⅰ、Ⅱ期阳性率为52.38%(11／21),Ⅲ、Ⅳ期阳性率为62.86%(22／35),两者比较差异无显著性(x2=0.585,P>0.05)(见表4)。2、Caspase-3在胆管癌及癌旁胆管组织中的表达在56例胆管癌组织中Caspase-3阳性表达率为39.29%(22／56),对照组癌旁胆管组织27例中阳性表达率为88.89%(24／27),进行卡方检验分析两组阳性率差别有统计学意义(x2=14.01,P<0.05)(见表2)。把胆管癌组织分为男、女两组,Caspase-3的阳性率分别为41.18%(14／34)和36.36%(8／22),两者比较差异无显著性(x2=0.127,P>0.05)。依胆管癌分化程度分为高、中、低分化组,Caspase-3阳性率依次为58.62%(17／29)、30.77%(4／13)、7.14%(1／14),三者比较差异有显著性(x2=10.808,P<0.05)。淋巴结转移组Caspase-3阳性率为41.94%(13／31),淋巴结无转移组Caspase-3阳.性率36.00%(9／25),两者比较差异无显著性(x2=0.201,P>0.05)。在胆管癌TNM分期中,Ⅰ、Ⅱ期阳性率为39.00%(8／21),Ⅲ、Ⅳ期阳性率为40.00%(14／35),两者比较差异无显著性(x2=0.020,P>0.05)(见表5)。3、Livin及Caspase-3在胆管癌组织中表达水平的相关性胆管癌组织中Livin及Caspase-3表达阳性情况进行Spearman等级相关检验。发现在胆管癌组织中Livin与Caspase-3的表达呈负相关关系(r=-0.295,P=0.028<0.05)(见表3)。结论(1) Livin蛋白在胆管癌组织中的表达明显高于癌旁胆管组织,提示Livin表达增高与胆管癌的发生发展有关。(2) Caspase-3蛋白在胆管癌组织中的表达明显低于癌旁胆管组织,提示Caspase-3表达降低与胆管癌的发生发展有关。(3) Livin和Caspase-3蛋白的表达与患者的性别、有无淋巴结转移、TNM分期无明显相关性,而与肿瘤的分化程度有明显相关性。(4) Livin和Caspase-3蛋白在胆管癌组织中的表达呈负相关。Livin蛋白激活和Caspase-3失活共同参与胆管癌的发病机制。