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第一部分AD患者血清miR-182表达水平测定及临床意义研究目的探讨血清标记物miR-182在首诊阿尔茨海默病(AD)患者治疗前后血清中的表达变化及其临床意义。研究方法收集40例首诊AD患者美金刚治疗前后的血清样本,并以40例健康志愿者作为对照,采用荧光定量PCR技术检测血清miR-182表达水平,ROC曲线评价血清miR-182表达水平对AD诊断的敏感度和特异度;同时评估AD患者治疗前后的简易智力状态检查量表(MMSE),分析血清miR-182表达水平与MMSE的相关性。研究结果1.miR-182在首诊AD患者血清表达水平显著高于对照组(z=-7.612,P<0.01)。2.美金刚治疗4个月后AD患者血清中miR-182表达较治疗前明显降低(z=-4.302,P<0.05)。3.患者血清miR-182表达水平与MMSE评分呈现负相关性(r=-0.546,P<0.05)。4.AD诊断的血清miR-182 ROC曲线下面积为0.904(95%CI:0.846~0.963,P<0.01),其灵敏度为89.1%,特异度为80.0%。结论本研究表明,miR-182可作为AD的血清标记物,在AD的诊断及评估病情方面具有良好的临床应用价值。第二部分mi R-182对AD模型细胞增殖及BDNF表达的影响研究目的通过验证mi R-182在AD模型细胞中的表达情况,探讨其对AD模型细胞增殖的影响,进一步寻找并研究mi R-182与目标基因之间的作用关系,从而对mi R-182在AD中的作用机制作初步探讨。研究方法选用不同浓度的Aβ1-40体外诱导SH-SY5Y细胞构建增殖活性受到抑制的AD细胞模型。q PCR法检测正常SH-SY5Y细胞和模型细胞中mi R-182的表达情况。Lipofectamine2000瞬时转染法转染AD模型细胞,再运用q PCR实验判断转染效果。CCK-8实验检测mi R-182对AD模型细胞的增殖活性的影响。选用mi Randa、Target Scan两大生物信息学数据库检索发现mi R-182的潜在下游靶基因BDNF,q PCR和Western blot检测过表达和敲低mi R-182对BDNF m RNA和蛋白水平的影响。研究结果1.mi R-182在AD模型细胞中的表达水平明显高于正常SH-SY5Y细胞(P<0.05)。2.与对照组相比,转染mi R-182组细胞的增殖率被明显抑制,而si RNA-mi R-182组细胞增殖能力显然较强(P<0.05)。3.在线数据库检索结果显示,mi R-182与BDNF的3’UTR之间存在碱基互补结合位点。4.过表达mi R-182组细胞BDNF的m RNA和蛋白表达显著降低,而敲低mi R-182,BDNF的m RNA和蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论本研究提示,mi R-182在AD发病机制中可通过抑制细胞增殖、降低BDNF的表达发挥作用,为进一步揭示AD的发病机制提供新的实验支持。