辽宁地区野禽FAdV-4感染的调查及其Penton基因序列分析

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Ⅰ群禽腺病毒血清4型(Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起安卡拉病,即心包积水-肝炎综合征(Hydropericardium Hepatitis syndrome HHS),以肝炎和心包积液为主要特征,主要感染3-6周龄的仔鸡,一旦感染,死亡率可达80%。禽腺病毒属于腺病毒科禽腺病毒属,根据其抗原性的不同可分为3个群,其中Ⅰ群禽腺病毒包含5个基因型(A-E),12个血清型,FAdV-4属于Ⅰ群禽腺病毒C型。随着家禽FAdV-4感染报道的不断增多,野禽感染FAdV-4的报道也相继出现,但目前FAdV-4在野禽中的感染及流行情况尚不清楚。本试验通过PCR技术对野禽FAdV-4的感染情况进行检测,并对FAdV-4五邻体(Penton)基因序列进行分析,基本上了解了辽宁省病死野禽中FAdV-4的流行情况,掌握了Penton基因的遗传进化信息。本试验从辽宁省各地收集濒死及死亡的不同种类的野生禽类,共38例。采集其肝脏,提取基因组,利用PCR检测方法对病死野禽FAdV-4的感染情况进行调查,其中检测出29份阳性样本,病死野禽FAdV-4感染的阳性率高达76.32%。选取Penton引物检测结果为阳性的病死野禽肝脏,提取基因组,利用PCR技术对Penton基因进行扩增,并连接T载体,转化感受态细胞,进行Penton基因克隆及序列测定。本试验共构建了8株病毒的Penton-T载体,这8株病毒分别来源于不同品种的野禽,测序结果显示8株病毒的Penton基因长度均为1578bp,并对其核苷酸序列进行了同源性分析,对其氨基酸序列进行了同源性分析及抗原表位分析。核苷酸同源性分析结果显示,这8株病毒的Penton基因与GenBank中Ⅰ群禽腺病毒C型(血清4型)的同源性为99.4-99.9%,同源关系最近;与GenBank中国内FAdV-4代表株的同源性为99.6-99.9%,与国外的同源性为98.4-99.7%,与国内FAdV-4的同源关系最近。核苷酸的变异位点主要集中于4处,第772位由G变成了A(G→A),第826位A→G,第956位A→G,第1543位G→A。其中有6株病毒株的Penton基因均在这4个核苷酸位点发生变异,与其它已报道毒株有明显的不同,代表了辽宁省内FAdV-4在野禽中的近期流行趋势。与GenBank中Ⅰ群禽腺病毒C型(血清4型)的Penton蛋白氨基酸同源性分析结果显示,同源性为98.1%-99.4%,对氨基酸突变位点的抗原表位进行分析,结果显示,第258位G→S抗原指数0.46→0.55,第276位S→G抗原指数-0.45→0.35,抗原指数的变化对于疫苗的研制及流行毒株的选取具有一定的参考价值。综上所述,辽宁省病死野禽中FAdV-4的阳性感染率高达76.32%,野禽FAdV-4的流行毒株与家禽的流行毒株相比存在特异性的变异位点。本试验为进一步研究FAdV-4在野禽中流行毒株的毒力、致病性及疫苗的研制奠定了基础。
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