我国约有300多万因角膜病致盲的患者，角膜移植术尤其是穿透性角膜移植术是这些患者的重要复明手段。角膜移植术是目前同种器官移植中成功率最高的一种组织移植手术，对眼部条件好的病例，术后第1年的排斥率仅为10％，但对于病情复杂的高危角膜移植病人(High-risk keratoplasty patients)如：受体眼表新生血管化、持续炎症、结角膜化学伤、大植片移植、第二次移植等病人，虽通过HLA配型或局部和全身应用免疫抑制性药物等方法，术后角膜移植片的存活率仍小于35％。因此，如何提高有高危因素眼的角膜移植术后存活率已成为目前临床亟待解决的问题，而寻找高效低毒的免疫抑制剂是解决此问题的研究热点之一。 近年来，发现山茱萸总甙(Cornus officinalis glycosides，COG)有明显抑制免疫反应作用，是一种有效的免疫抑制剂。全身应用山茱萸总甙已证明对防治实验性大鼠异位心脏移植术后的排斥反应有一定的对抗效应，但尚未见用于角膜移植排斥反应的报道。 本课题旨在观察山茱萸总甙对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治作用；并研制出山茱萸总甙局部应用剂型—水溶性滴眼液，对其药代动力学、眼部毒性及药效学进行研究；并通过与其他免疫抑制剂以及局部抗新生血管制剂的联合应用，能明显延长实验性角膜移植排斥反应的发生时间。为临床防治角膜移植排斥反应提供新的综合治疗方案。山茱萸总甙的全身和局部应用较少甚至不引起毒副作用，具有较优异的临床应用前景。暨南大学博士学位论文（2003）应用山莱英总筑防治角膜移植排斥反应的实验研究（中文摘要） 第一部分山莱荚总贰全身应用对大鼠角膜移植免疫 排斥反应的防治作用 目的 观察不同剂量的山莱笑总贰（COG）灌服对大鼠同种异体角膜移植免疫排斥反应的影响；并与单独灌服环抱霉素AcSA讨与CSA联合应用比较，观察其效果，为临床防治角膜移植排斥反应提供有效用药方案。 方法 建立封闭群大鼠SD－istar组间同种异体角膜移植模型，SD为供体，Wstar为受体，随机分组（A，D～J共8组）。其中A、B、C组为对照组：A组为空白对照组，B组为Wstar－Wstar对照组，即Wstar大鼠间同种异体移植，C组为Wstar自体对照组；D－G组为单一用药组：D组为灌服CsA＊响KgM）组，E组为灌服 COG伍0呷／Kg／）组，F组为灌服 COG讨）组，G组为灌服 COG （240m／Kg用）组；H－1组为联合用药组：H组为灌服 COG（60lllg／Kg／d）联合灌月CsA（10mg／Kg／d）组，I组为灌服COG（120mg／Kg／d）联合灌服CsA（10m以吨／d）组，J组灌服COG（240响他M）联合灌服CsA＊ 组。用裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜植片透明度、水肿度、新生血管度、移植排斥指数（RI）及角膜排斥发生时间；并在术后第15天和30天观察各组的病理学改变。 结果 回．单一用药组中从总的抑制角膜移植排斥反应的效应来看：三种剂量山茉英总贰（COG）口服给药均可有效的防治角膜移植排斥反应，其作用随着用药剂量的加大而增大。其中 COG的0mg／Kg／d）日服作用效果与 CsA＊0mg／Kg／d）日服相比无显著性差异。各组对新生血管的抑制均无明显疗效。2．联合用药组中从总的抑制角膜移植排斥反应的效应来看：灌服 COG120ngKgd＋CsA10lllgKgd组与灌服 COG240mg／Kg／d＋CsA10lllgKg用组效应最佳，而且两者之间相比疗效无显著性差异①＞0刀5卜3．单一用药与联合用药相比，从总的疗效比较联合用药组的疗效优于单一用药组；从角膜植片的存活时间以及生存曲线可看出：对照组角膜移植片存活时间最短，平均11．00士2．07天，灌服COG240mg／阿d－CsA10mg／KgM组最长，平均22．00士l．79天。4．病理检查：HE染色，15天时A、D两组角膜可见植片增厚，角膜上皮细胞增厚，基质中可见大量的淋巴细胞浸润及新生血管形成，缝线 2暨南大学博士学位论文（200）应用山荣英总贰防治角膜移植排斥反应的实验研究（中文摘要）处可见异物巨细胞（为吞噬细胞）反应，基质细胞排列不规则；F组15天时可见角膜植片厚度略增厚，但角膜上皮基本完整，基质中有少量的淋巴细胞浸润及新生血管形成，角膜基质细胞排列规则。30天时A、D、E、F组均见角膜基质变薄，新生血管萎缩，瘫痕形成。G、I、J组15大时可见角膜植片厚度基本正常，角膜上皮完整，基质中仅有少量淋巴细胞浸润，新生血管少见，角膜基质细胞排列规则。30天时G、H、L J角膜基质增厚，淋巴细胞和新生血管增多，此时与A组15天时病理表现相似。B、C组30天时可见角膜植片厚度正常，基质中仅有少量淋巴细胞浸润，无新生血管。 结论 山茉英总贰具有一定的延长角膜移植片存活的效应：与环泡霉素A具有互相协同作用，可较明显地延长移植片存活时间：这对临床防治角膜移植免疫排斥反应具有一定的参考价值。 第二部分山莱英总贰对细胞免疫抑制作用机理研究 目的 观察山茉荚总贰对大鼠角膜移植模型细胞免疫功能影响，并通过观察外周血淋