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山莓(Rubus corchorifolius L. f)是蔷薇科悬钩子属植物,是湘西、鄂西北等地区少数民族长期使用的传统中草药,用于治疗人畜腹泻,效果良好。因此,研究其抗腹泻物质基础及作用效果,具有一定理论与应用意义。
该论文以山莓叶为原材料,开展了其粗提物(80%乙醇提取物,简称粗提物)对小鼠不同腹泻类型的治疗效果研究,采用兔离体肠模型对其中有效成分进行分离纯化,并将纯化得到的单体进行结构鉴定和活性研究。主要研究结果如下:
1、小鼠不同腹泻类型的治疗效果研究。采用番泻叶、蓖麻油、硫酸镁、致泻大肠埃希氏菌四种致泻剂建立小鼠腹泻模型,以腹泻率、稀便率、稀便级、腹泻指数为观察指标,研究并比较山莓叶粗提物、硫酸阿托品及颠茄磺苄啶片对这四种腹泻模型的作用效果。结果表明:山莓叶粗提物累积剂量分别为1.00g/10g、0.50g/10g和0.25g/10g时对四种腹泻模型均有抑制作用,其中对番泻叶、蓖麻油和致泻大肠埃希氏菌导致的小鼠腹泻有极显著抑制效果,对硫酸镁导致的小鼠腹泻效果微弱。
2、抗家兔离体肠运动活性稳定性研究。建立抗家兔离体肠运动的活性跟踪模型,通过单因素试验,考察温度、光照、pH对其抗家兔离体肠运动活性的影响。结果表明:室温下抑制肠蠕动效果好,高温(>90℃)可能会使其变性而丧失活性;光对抗腹泻活性物质的影响不显著;不同pH值处理样品对其抗腹泻活性影响较大,酸性条件有利于抗腹泻活性,而在碱性环境中其抗腹泻活性得到抑制。粗提物经过脱鞣质处理,会使粗提物活性有一定降低,说明鞣质可能是其中抗腹泻活性成分之一,同时还存在其它抗腹泻活性成分。
3、抗家兔离体肠运动活性成分分离。以抗家兔离体肠运动实验为活性跟踪模型,用系统分离方法对山莓叶粗提物进行分离。先采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取后,其活性段主要集中在乙酸乙酯层;然后对山莓叶乙酸乙酯层进行中压柱层析、低压柱层析分离,得出活性组分Fr.13具有较强的抑制家兔离体肠运动的活性。
4、抗家兔离体肠运动活性单体制备及活性研究。对上述组分Fr.13进行液相分离与制备,得到抗腹泻活性物质Fr.b,液相色谱图显示其为两个活性单体。纯化中得到另一新化合物16α、17、18-三羟基-对映-贝壳杉烷-18-O-β-D-葡萄糖苷,其无显著抗腹泻活性,但对HepG2肝癌细胞有一定的抑制作用。