蒙药三臣丸是传统的蒙成药儿科处方制剂,由牛黄、红花、天竺黄3味按照1:1:1等量组成,牛黄属于珍贵、稀缺药材,牛黄中所含主要药效成分为胆酸类成分,其具有刺激胆汁分泌,促进脂类的乳化和吸收的药理作用,其中胆酸类成分（胆酸、猪去氧胆酸）是发挥镇咳和祛痰作用的药效成分,中国药典2015版牛黄项下已经制定了胆酸的含量测定方法。红花具有凉血,锁脉,调经,清肝,强身,止痛,消肿等药理作用,红花中主要药效成分为红花黄色素,而红花黄色素中的主要有效成分为羟基黄花黄色素A,中国药典2015版中羟基红花黄色素A作为红花药材中具代表性的活性成分制定了其含量测定方法。天竺黄作为一种特色蒙药,在蒙成药中具有十分重要的地位,用于治疗肺热咳嗽、气喘、骨折、伤热、黄疸、肺刺痛、急性气管炎等症。目前为止,三臣丸中药效成分及其在体内的药物代谢动力学尚无系统研究,因此尚不明确产生三臣丸功效的具体化学成分和作用机制。三臣丸具有治疗肺热咳嗽等症的疗效,我们选用非小细胞肺癌细胞（A549细胞）对三臣丸中的药理活性成分进行检测,探讨三臣丸的入血成分对A549细胞的药理作用,并利用HPLC-MS/MS技术建立一个可同时定量分析大鼠血浆中多种成分的方法,应用于三臣丸在大鼠体内药代动力学研究,推测其可能的代谢途径。本研究从血浆药化-血浆药理-药代动力学研究三个方面阐明了三臣丸中可能的药效物质,以期为三臣丸的开发利用提供科学依据。本研究的第一部分是利用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪,首先通过HPLC对三臣丸中的化学成分进行分离,再经过高分辨Q-Exactive检测器在正负离子模式下对化合物进行的一级全扫描及多级碎片扫描,获得化合物的一级分子离子峰及二级碎片离子信息。通过对比对照品及文献报道的保留时间、一级质谱及二级碎片离子,结合此类化合物的裂解规律,对其进行定性分析,共鉴定出三臣丸中的46种化学成分,其中红花中38种,牛黄中8种,以期为三臣丸的药效物质基础及质量评价研究提供依据。本研究的第二部分是基于血浆药理对三臣丸药效成分的研究,药物发挥药效作用的是其入血成分,基于课题组前期对三臣丸血清药化的初步研究,发现并指认出了三臣丸中6种原型活性入血成分,分别为胆酸、猪去氧胆酸、羟基红花黄色素A、紫丁香苷、脱水红花黄色素B和山奈酚-3-O-芸香糖苷6种活性成分^[1],且这6种成分均为文献报道的有明确药理作用的活性成分。通过血浆药化-血浆药理结合的方式研究血浆中对A549细胞具有药理作用的成分,基于对6种成分在血浆中的5个不同时间点进行定量分析,含药血浆进行体外血浆药理实验,得出含药血浆具有抑制A549细胞增殖及参与A549细胞凋亡的药理作用,并具有量效关系;基于谱效关系,得出与A549细胞存活率的相关系数排序为:羟基红花黄色素A>猪去氧胆酸>脱水红花黄色素B>紫丁香苷>山奈酚-3-O-芸香糖苷>胆酸;与A549细胞内ROS含量的相关系数排序为:羟基红花黄色素A>猪去氧胆酸>紫丁香苷>脱水红花黄色素B>山奈酚-3-O-芸香糖苷>胆酸。本研究的第三部分是对三臣丸中入血的6种活性成分进行体内的药代动力学研究,结果表明,胆酸和猪去氧胆酸的t_1/2分别为4.05±2.82 h和3.85±1.69 h,T_max分别为3.33±4.44 h和3.53±4.33 h,2个成分的结构相似,其药动学参数差异较小;羟基红花黄色素A的C_max为1,400.48±1,57.10μg·L^-1,AUC_0-t为4,925.16±1,078.07μg/L*h,其C_max、AUC_0-t值明显高于其它的成分,在三臣丸中有较高的生物利用度;而山奈酚-3-O-芸香糖苷,脱水红花黄色素B和紫丁香苷的AUC_0-t和C_max排序均为山奈酚-3-O-芸香糖苷>脱水红花黄色素B>紫丁香苷,且与三臣丸中三个化学成分的含量排序相同。三臣丸药动学结果表明,由于药物在体内的协同作用,6个活性成分在体内的生物利用度均有不同程度的提高。综上,基于对三臣丸中活性成分的鉴别及药代动力学研究,采用HPLC-MS/MS技术对三臣丸中化学成分鉴定的基础上,从“血浆药理-药代动力学”二个方面阐明了三臣丸中可能的药效物质,获得三臣丸中具有A549细胞抑制作用的药效成分及其体内吸收代谢规律,以期为三臣丸的开发利用提供科学依据。