【摘 要】
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目的:肺癌是一种高发病率和高致死性的疾病,目前对非小细胞肺癌的治疗主要有手术和手术后放化疗,手术是早期非小细胞肺癌的主要治疗方法,但仍无法明显提高术后的5年存活率。化疗是非小细胞肺癌术后的主要治疗手段之一,也是目前研究的重点,但化疗耐药现象的存在严重阻碍了化疗药物的应用。本研究旨在研究肿瘤干细胞中的LAMB1通过微环境调控非小细胞肺癌EMT及化疗耐药的作用机制,以期为非小细胞肺癌化疗提供新的治疗靶
【基金项目】
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云南省科技厅科技计划昆医联合专项,基于对肿瘤干细胞外泌体 LAMB1 的调节研究非小细胞肺癌化疗耐药机制（2019FE001（-119））
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目的:肺癌是一种高发病率和高致死性的疾病,目前对非小细胞肺癌的治疗主要有手术和手术后放化疗,手术是早期非小细胞肺癌的主要治疗方法,但仍无法明显提高术后的5年存活率。化疗是非小细胞肺癌术后的主要治疗手段之一,也是目前研究的重点,但化疗耐药现象的存在严重阻碍了化疗药物的应用。本研究旨在研究肿瘤干细胞中的LAMB1通过微环境调控非小细胞肺癌EMT及化疗耐药的作用机制,以期为非小细胞肺癌化疗提供新的治疗靶点。方法:1、比较非小细胞肺癌中肿瘤干细胞和非干性细胞中LAMB1的表达差异:取人实体瘤组织以及非小细胞肺癌细胞系A549、NCI-H1650、H1975、用磁珠富集法（CD44+）分离干性及非干性细胞类群。2、探讨非小细胞肺癌肿瘤干细胞中LAMB1对肿瘤细胞增殖,侵袭、迁移的影响:选经过磁珠富集分选的典型细胞系（如A549）的干性细胞,慢病毒介导Sh RNA法敲低干性细胞中的LAMB1,在Transwell小室共培养模型下检测肿瘤细胞的侵袭、迁移等。3、探讨非小细胞肺癌肿瘤干细胞中LAMB1对PI3K/Akt和MEK/ERK信号通路的影响:选上述经慢病毒介导Sh RNA法敲低干性细胞中的LAMB1,western blot检测其对PI3K/Akt和MEK/ERK信号通路相关蛋白的表达情况。4、探讨非小细胞肺癌肿瘤干细胞中LAMB1对肿瘤细胞化疗耐药的影响:选上述经慢病毒介导Sh RNA法敲低的LAMB1构建裸鼠移植瘤模型,对小鼠进行吉西他滨和紫杉醇给药综合判断敲低LAMB1的表达对非小细胞肺癌化疗耐药的影响。结果:1、成功分离了干性与非干性细胞。2、构建了LAMB1敲低的稳转细胞系以及裸鼠成瘤实验。3、发现敲低LAMB1的表达导致PI3K/Akt和MEK/ERK信号通路磷酸化激活受阻进而抑制了非小细胞肺癌EMT的发生。4、裸鼠移植瘤模型证实,敲低LAMB1的表达可以使NSCLC细胞化疗增敏。结论:肿瘤干细胞中的LAMB1通过微环境影响非小细胞肺癌的增殖,侵袭、迁移及化疗耐药,而LAMB1是通过影响非小细胞肺癌中PI3K/Akt和MEK/ERK信号通路介导EMT的实现来对非小细胞肺癌化疗耐药起重要调节作用
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