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兽药的滥用与违法使用，使全国乃至全世界的环境与人类身体健康造成了巨大的危害。甾体激素是亲脂疏水性化合物，属于兽药范畴，常作为蛋白质同化剂被大量应用在养殖业中。因其长期滥用可提高机体致癌致畸的风险，引起了人类对其残留分析的普遍关注。因此，对其在动物源性食品中残留状况进行检测分析方法研究具有重要意义。本文研究的甾体激素包括醇勃龙、宝丹酮、睾酮、甲睾酮、19-去甲睾酮、美雄酮、黄体酮、地塞米松、甲基泼尼松、泼尼松、曲安西龙、曲安奈德12种，样品基质为市售牛肉与鸡肉，采用超高效液相色谱-串联质谱仪器，对比优化两种前处理方法（传统固相萃取法与基质固相分散法），对线性关系、回收率和重现性进行研究，并对方法的可靠性进行了验证。研究的主要结果如下：（1）分析方法的建立选用串联质谱多反应监测模式（MRM）对标准混合溶液采集信号，采用正负离子切换模式，选取各目标化合物合适的分子离子峰及电离方式，同时经过子离子扫描，确定了特征离子；通过对液相色谱条件的优化，最终确定以色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×50mm，1.8μm）分离目标化合物，以甲醇-5mmol乙酸铵0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱，流速为0.4mL/min，柱温为40℃进行测定，12种目标化合物可在6min内完全分离。（2）样品前处理方法对比固相萃取法（SPE）：基质经1%乙酸乙腈提取后，Oasis HLB固相萃取柱净化，甲醇-乙腈混合溶剂洗脱，氮吹后经乙腈水溶解后检测；基质固相分散法(MSPD)：用1%乙酸乙腈提取，经基质固相管净化后，氮吹浓缩，乙腈水稀释，待超高效液相色谱-串联质谱仪检测。基质固相分散法在固相萃取法的基础上，简化了前处理步骤，缩短了前处理时间，为快速检测动物源性食品中甾体激素多残留的检测提供了理论基础。（3）方法学验证两种方法的标准曲线的线性相关系数r均大于0.99，固相萃取法的方法检出限(LOD)在0.3～1.0μg/L之间，牛肉中的平均回收率为64.75~112.53%，相对标准偏差为4.63~11.21%；鸡肉中的平均回收率为72.48~114.52%，相对标准偏差为3.93~11.17%。基质固相萃取法的方法检出限(LOD)在0.2～0.8μg/L之间，牛肉中的平均回收率为72.7~116.56%，相对标准偏差为1.66~11.3%；鸡肉中的平均回收率为76.16~123.3%，相对标准偏差为3.4~11.78%，两种方法的回收率和精密度均满足残留分析的要求，基质固相分散法的方法检出限较低，回收率较高，且前处理较为简单。