论文部分内容阅读
以不同生长发育时期的烟草花蕾为材料，利用RT-PCR方法扩增得到与烟草叶片中Beclin-1基因同源的部分cDNA序列，克隆获得679bp类Beclin-1基因。Northern blotting分析表明，在烟草花蕾发育中期的类Beclin-1基因的表达信号强，花蕾中期类Beclin-1基因表达高于初期和后期。DNA ladder实验证明了在烟草花蕾发育过程中出现了标志细胞程序性死亡特征的DNA梯状片断。结果表明：在烟草花蕾发育的进程中，其绒毡层逐渐的退化，花粉不断形成的这一细胞程序性死亡(programmed cell death PCD)过程。 具体研究结果如下： 1、本文以不同发育时期的烟草花蕾为实验材料。通过CTAB法提取DNA并进行TBE琼脂糖电泳检测，结果表明：在花蕾发育的过程中出现了标志着PCD特征的DNA降解的梯状图谱，反复检测结果发现在花蕾发育的过程中会产生DNA阶梯状条带。 2、通过TRIZOL方法提取不同发育时期的烟草花蕾的RNA。采用RT-PCR法首次从正常发育的烟草花蕾中中克隆得到类Beclin-1基因的cDNA的序列，克隆、测序得到679bp片断，将扩增的序列进行Blast比对：与烟草叶片受到TMV病毒侵染而诱发超敏感反应相关的Beclin-1的cDNA序列同源性为97.5％。 3、根据地高辛杂交试剂盒(罗氏公司)方法，运用了灵敏度、特异性高的RNA作为探针进行Northern杂交，探讨在不同发育时期的烟草花蕾中的类Beclin-1基因的表达情况。结果分析表明：烟草的花蕾中期，是类Beclin-1基因表达明显高于花蕾初期和后期，表明花蕾发育的中期为初期PCD发生的活跃期。可能说明中期发育的花蕾是PCD发生的初级阶段。 本实验结果表明：烟草花蕾在生长发育阶段发生了细胞程序性死亡，在发育的进程中发生绒毡层逐渐的退化和花粉不断形成的细胞程序性死亡现象。对植物生长发育的PCD进行了进一步研究奠定基础。进而为研究植物生殖器官分化的分子机理奠定理论基础。