目前对恶性肿瘤的治疗主要方法包括手术治疗、放射治疗和化学治疗。手术治疗仍是目前最常用于恶性肿瘤治疗的手段,对于许多早期局部发生的肿瘤有着良好的治疗效果。但是在弥漫性发生的恶性肿瘤(如白血病,晚期肿瘤广泛转移等)、重要器官浸润生长的恶性肿瘤、远处发生隐匿转移的恶性肿瘤则治疗效果较差甚至无法进行手术治疗。放射治疗和化学治疗对正常组织亦会有杀伤从而产生较大的副作用;肿瘤耐药性的产生对化学治疗的应用也有了较大的限制。总之,应用现有的治疗手段治疗恶性肿瘤不能令人满意。近年来,随着分子生物学、免疫学的发展,人们对恶性肿瘤的生物学行为有了更加深刻的认识。恶性肿瘤是一种基因相关疾病,恶性肿瘤细胞和正常组织细胞既有着相似性和同源性,又有异质性。与正常细胞相比较,肿瘤细胞无论在形态结构、生化组成或代谢功能等方面都发生了很大的改变,而在结构上发生改变的糖蛋白或糖脂分子可以成为肿瘤细胞的新抗原,即肿瘤抗原(tumor antigen)。其中有些抗原分子为某种肿瘤所特有,而在正常组织细胞中无表达,称为肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen,TSA)。TSA可刺激机体的免疫系统产生针对该细胞的特异性的免疫反应过程。机体的抗肿瘤效应分为细胞免疫应答及体液免疫应答,而前者起主要作用,其效应细胞为T淋巴细胞,在抗原递呈细胞(APC)递呈的刺激下可诱导产生针对表达该抗原的肿瘤细胞特异性的细胞毒性反应,即CTL效应,同时对正常组织无损伤。APC将抗原加工递呈到细胞表面,与MHC分子形成抗原肽(9-14个aa)-MHC复合体递呈给T细胞,使之活化,发挥抗瘤效应。肿瘤免疫治疗正是利用了这些理论所采取的策略。黑色素瘤相关抗原(MAGE)最早在1991年被学者发现的,它是从人黑色素瘤细胞系(MZ2)分离出的抗原,可以被细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)所识别。而后的数年间,更多种新的MAGE基因被发现,共称为MAGE基因家族,该家族成员的共有特点:定位于X染色体;拥有开放阅读框(open reading frame,ORF),该基因编码的蛋白质C末端含有约200个氨基酸残基的同源序列;在黑色素瘤及其他多种恶性肿瘤均有不同程度的表达,而在除外睾丸和胎盘以外的正常组织中无表达。因其高度的特异性,MAGE蛋白作为抗肿瘤免疫的靶抗原,为肿瘤的特异性免疫治疗提供新的方法和途径。许多学者应用MAGE作为肿瘤治疗的靶抗原进行了大量的研究工作,在相当一部分恶性肿瘤的实验治疗中取得了满意的效果。为增强肿瘤疫苗的免疫效果,不同的学者针对肿瘤疫苗免疫过程中的不同环节做了大量的研究工作。随着基因工程技术和免疫学的发展,人们已可以对抗原氨基酸序列进行分析研究,测定抗原表位,并精确地确定了决定免疫功能的特定序列。在肿瘤抗原改造方面,近期的研究主要集中在优势表位的筛选和组合。因为机体免疫系统产生的肿瘤免疫应答主要依靠细胞免疫,作为主要的效应细胞CD8+的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)因其能特异性的识别并直接杀死肿瘤细胞而受到更多的关注。因此,改善肿瘤疫苗的设计方案之一,就是在疫苗中包括这些能够诱导CTL效应的MHC II类分子限制的抗原表位。有进一步的实验发现,单一的抗原表位不能诱导T淋巴细胞产生出足够强度的杀伤效应,因此有人尝试在同一载体内负载多个抗原表位的方法,因此本文所选择的目的基因正是覆盖了三个个高亲和力的抗原表位进行实验,探讨其作为肿瘤免疫治疗的可行性。实验首先于体外合成该短肽片段(EADPTGHSY),冲击树突状细胞后与淋巴细胞共混获得效应细胞,应用MTT法观察其对肿瘤细胞生长的抑制作用。以野生型癌株作为靶细胞,应用MTT法及LDH方法观察其对淋巴细胞增殖及CTL效应的影响。实验结果表明MAGE-1短肽致敏的树突状细胞可激活T淋巴细胞,产生抑瘤效应。为MAGE-1短肽疫苗的抗瘤研究奠定了基础。本研究进一步应用PCR技术从人基因组中得到DNA片段,构建重组表达MAGE121-169质粒载体,在原核表达体系中诱导表达。经Westren Blot杂交鉴定、镍凝胶亲和层析法纯化目的蛋白。3H掺入法检测目的短肽诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应。MTT法检测其对T细胞免疫活性的影响。结果显示MAGE-1127-169短肽在大肠杆菌中以包涵体形式表达。Western-blot检测收获的表达产物证实为所需的目的蛋白。与淋巴细胞共孵育后测得的淋巴细胞增殖指数明显增加。首选经该短肽致敏树突状细胞,与T细胞作用后,活化的T淋巴细胞可明显抑制肿瘤细胞的生长。结果提示本研究成功诱导了MAGE-1127-169短肽的原核表达,获得纯度较高的MAGE-1121-169短肽,掌握了该短肽的表达和纯化的最适条件,同时证明在一定浓度下目的短肽可于体外诱导小鼠的特异性淋巴细胞增殖,并产生有效的CTL效应。提示了存在多个抗原表位MAGE-1121-169短肽可更好的诱导淋巴细胞增殖,诱导产生CTL效应,具有良好的免疫原性,可作为肿瘤治疗的靶点。