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目的:通过观察不同作用时间及不同浓度H2O2对大鼠胶质瘤C6细胞活力的影响,探索氧原子对胶质瘤细胞杀伤作用的药效及可能的作用方式。方法:1选择大鼠胶质瘤C6细胞作为实验对象,用MTT法测定细胞生长曲线,了解其生长特性。2细胞培养:将大鼠胶质瘤C6细胞置于含10%FBS、100U/ml双抗的RPMI-1640培养基中,37oC,5%CO2环境下进行培养。待其占满约90%培养瓶底时,制备细胞悬液,计数,调整细胞浓度约104/ml,分组接种于96孔培养板中。3实验分组:按干预时间分为5min,10min,15min组,每个时间组分为正常对照组,1% H2O2组,2% H2O2组,3% H2O2组,4% H2O2组,空白对照组。每种干预情况下都设30个复孔。空白对照组各孔加100μl培养基,其余各孔加100μl细胞悬液,37oC,5%CO2环境下进行培养4小时。4细胞活力测定:首先应用荧光倒置显微镜观察加MTT前各组细胞形态及加MTT后染色情况,初步判定胶质瘤C6细胞的活力。按预定分组进行干预,每孔用培养基小心洗涤3遍。加培养基,每孔200μl,荧光倒置显微镜下观察并照相。每孔加5mg/mlMTT溶液15μl,37oC,5%CO2环境下进行培养4小时,荧光倒置显微镜下观察并照相。而后小心吸取每孔的培养液,各孔加150μl二甲基亚砜（DMSO）,微量振荡器上震荡10min,应用酶标仪于570nm处测各孔吸光度值（OD值）,对各组胶质瘤C6细胞活力进行定量测定。以上实验重复3次。5经H2O2处理后大鼠胶质瘤C6细胞超微结构变化:分别对各组用0.125%胰酶﹢0.01%EDTA消化,制备细胞悬液,1500rpm离心10min,弃去上清液,留离心管底细胞,加2.5%戊二醛固定4小时。用pH 7.13的0.11 molPL PBS缓冲液冲洗并过夜,逐级缓慢脱水, Epon81浸透和包埋,超薄切片,醋酸铀（铅）双染色,日立H-7000透射电镜下观察观察细胞结构的超微变化。6统计学处理:各组OD值用均数±标准差（?x±s）描述（Tab.2）,并对各组OD值进行析因设计方差分析（F检验）,组间两两比较采用SNK多重比较检验方法检验,以p<0.05为有显著性差异。结果:1用MTT法测定生长曲线:以培养时间为横轴,平均OD值为纵轴,绘制生长曲线。曲线显示C6细胞有明显对数生长期及平台期,其细胞生长曲线可重复性好。2受试C6细胞活力改变:倒置荧光显微镜下观察受试细胞组与对照组比较细胞间空隙加大,胞体变圆,细胞间联系减少,部分细胞漂浮,细胞失去正常生长形态。对比加MTT后细胞,受试组细胞染色不显著,甚至不染色,正常对照组细胞染色显著。提示受试细胞活力丧失。3透射电镜观察结果:正常对照组细胞胞膜完整,染色质居于细胞核中,内质网、核糖体完整。干预组可见细胞膜、核膜缺损,胞质、细胞核水肿;细胞核不规则,有凹陷;线粒体空泡化,水样化,嵴消失;粗面内质网高度扩张。提示细胞坏死。4统计分析结果:统计数据见表2（Tab.2）,对各组OD值进行析因设计方差分析（F检验）p<0.05,组间有显著差异。组间两两比较采用SNK方法检验,正常对照组与其余各组间p<0.05 ,有显著性差异;其余各组间p>0.05,无显著差异。结论:1 C6细胞生长稳定,可满足实验要求。2细胞干预组与对照组相比,失去了正常细胞形态,不被MTT染色,细胞活力下降或丧失。3 H2O2干预的各实验组与空白对照组比较对C6细胞的作用无显著性差异,都可使C6细胞活力完全丧失。正常对照组与其他各组比较对C6细胞的作用有显著性差异。4本实验各浓度的H2O2对C6细胞具有杀伤作用,作用方式为致细胞坏死为主。