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目的：探讨RNA干扰技术沉默Bmi-1基因对CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞生物学特性包括增殖、成球、分化、克隆形成、迁移、侵袭、细胞周期分布、体内致瘤能力和化疗敏感性的影响及其作用机制研究。方法：（1）设计、合成并构建针对Bmi-1基因序列特异性的短发卡RNA（shorthairpin RNA，shRNA）慢病毒（LV-Bmi-1shRNA），感染通过流式细胞仪分选出的CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞，同时设置空载体组和空白对照组。（2）利用荧光显微镜及流式细胞仪观察并检测感染效率，荧光实时定量PCR及Western blot方法检测感染前后细胞Bmi-1及其下游基因p16INK4a、p14ARFmRNA与BMI-1、P16INK4a、P14ARF及P53蛋白的表达情况。（3）采用CCK-8增殖实验检测LV-Bmi-1shRNA对人CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞增殖的作用；成球实验检测沉默Bmi-1基因前后细胞的成球能力；划痕实验、Transwell小室基质迁移及侵袭实验，观察Bmi-1基因表达沉默后对CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞迁移与侵袭能力的影响；平板克隆形成实验及MTT比色法检测感染前后细胞的克隆形成能力及对化疗药物5-FU及顺铂的敏感性；流式细胞仪分析各组细胞周期分布；裸鼠皮下移植检测细胞体内致瘤能力，并采用免疫组织化学技术检测瘤体组织中CD44的表达情况。结果：（1）鼻咽癌SUNE-15-8F细胞中CD44+细胞所占的比例大约为52.4%（32%~53%）；（2）将构建好的LV-Bmi-1shRNA成功感染入CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞，感染效率达95%以上。（3）LV-Bmi-1shRNA感染有效地抑制了CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞中Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达水平（P<0.05），而其下游基因p16INK4a、p14ARFmRNA与P16INK4a、P14ARF及P53蛋白的表达则上调。（4）与空载体组、空白对照组相比，LV-Bmi-1shRNA感染组细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭、成球和致瘤能力明显受到抑制；G0/G1期细胞比例增加，G2/M及S期比例降低；对5-FU及顺铂的敏感性增加；（5）未感染细胞及空载体组细胞可在裸鼠体内形成肿瘤，且瘤体组织中CD44呈阳性（+++）表达，而CD44-鼻咽癌细胞和LV-Bmi-1shRNA感染组细胞则不能在裸鼠体内形成肿瘤。结论：（1）CD44+鼻咽癌细胞的体内致瘤能力强于CD44-鼻咽癌细胞，并具有分化的能力，呈现干细胞样特性；（2）LV-Bmi-1shRNA感染能有效地抑制Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达；（3）LV-Bmi-1shRNA介导的Bmi-1基因沉默能抑制CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭及成球与体内致瘤能力，使细胞周期发生阻滞，并使其对化疗药物5-FU及顺铂的敏感性增加。而其作用机制可能是通过Bmi-1-P16INK4a/P14ARF-P53通路介导的。表明Bmi-1基因的表达可能对CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞干细胞样特性的维持有着重要作用，并由此可能成为鼻咽癌治疗的一个潜在的新靶点。