C反应蛋白是炎症的客观制造者之一,血清中CRP的浓度在感染、组织损伤或其他炎症条件下会增加上千倍,而且CRP是心血管疾病的重要危险因素。因此,检测和控制CRP水平对临床感染性疾病和心血管疾病的治疗至关重要。目前,用于CRP测定的方法有乳胶凝集法、单项免疫扩散法、免疫比浊法、电化学发光免疫分析法、胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫层析法等。这些方法存在一些缺点如耗时耗力、灵敏度低等,所以探索一种快速、简便、可靠的CRP检测方法具有重要的预防和治疗意义。本研究以生物化学、材料化学、纳米科学、有机化学、分子生物学、免疫学等知识为理论指导,基于新型多功能磁性纳米材料平台,建立了一种新型的检测方法,用于在液体中无标记特异性检测和收集急性炎症与心血管疾病标记物C反应蛋白。免疫磁珠是由磁珠表面结合免疫配基制成的,用磁性纳米材料作为固相,在其表面包裹高分子层,最后通过修饰,共价交联免疫配基形成的。本研究用活化剂EDC/NHS活化羧基磁珠表面的羧基基团,在羧基磁珠表面固定CRP抗体,制备免疫磁珠,搭建新型多功能磁性纳米材料平台,检测CRP蛋白。本研究首先研究偶联液MES的p H值、活化剂、活化反应时间、抗体加入量、偶联反应时间等条件对新型多功能磁性纳米材料平台富集CRP效率的影响,确定免疫磁珠制备的最优实验条件:偶联液为p H=6.5的MES、活化剂为EDC/NHS、抗体加入量为70μg、偶联反应时间为2小时。实验表明采用EDC/NHS活化羧基磁珠,使纳米粒子进行表面改性,表面改性可有效提高纳米粒子和CRP抗体的偶联能力。在与CRP抗体接触后,活化后的羧基磁珠能够和CRP抗体结合。通过对磁珠进行表征,制备的表面偶联CRP抗体的磁珠粒径增加。偶联抗体前后,纳米颗粒大小的变化与CRP抗体浓度有很好的相关性。同时制备好的免疫磁珠能够特异性地识别CRP,在液体中与CRP进行抗原抗体反应,从而达到富集检测CRP的效果,并且富集率能够达到99%以上。本研究建立了一种基于多功能磁性纳米材料的平台,分离检测CRP的方法,为后续开发新型的CRP检测试剂盒以及自动化检测CRP的仪器提供了理论依据。