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以致病黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)人工感染的黄喉拟水龟(Maur emysmutica)肝组织为材料，应用SMART(switching mechanism at5end of RNA transcript)技术，构建了黄喉拟水龟的全长cDNA文库。首先用SMARTTM PCR cDNAsysthesis kit合成全长的双链cDNA，通过琼脂糖凝胶分级分离技术切除小片段的cDNA，将大于500bp的cDNA连接到pGEM-T载体中，电转化到JM109感受态细胞。在构建好的文库中，经测定，文库约含有1.8×105个重组子，重组效率达90％，插入片段多在0.5kb～3kb之间。对库中长度约为1000bp的80个基因进行了测序，结果显示大部分在龟类首次发现。测序鉴定的基因包括免疫相关基因9个：转铁蛋白基因，补体C3基因，补体C9基因，血清蛋白基因，巨噬细胞炎症蛋白基因，血清淀粉样蛋白A基因，血浆铜蓝蛋白基因，α-2巨球蛋白基因和VSIG4;信号传导基因6个：RAS原癌基因，死亡相关蛋白基因，血管紧张素原基因，HIG1家族基因，锌指蛋白基因和disabled homolog2；催化酶类基因6个：酰基辅酶A合成酶基因，酪氨酸转氨酶基因，乙醛脱氢酶基因，氨基乙二酸半醛合成酶基因，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶基因，赖氨酸羟化酶基因；糖代谢相关基因2个：金属基质蛋白酶3基因和金属基质蛋白酶23基因；转运相关基因1个：可溶性载体家族基因；结构基因2个：delta-tubulin和beta-actin(ACTB)，等等。本研究构建成的黏质沙雷氏菌诱导的黄喉拟水龟全长cDNA文库构建成功，为免疫基因全长序列的筛选奠定了基础。
利用本实验室构建的黄喉拟水龟SMART全长cDNA文库，筛选得到编码MMP-3全长cDNA(命名为MaMMP3), MaMMP3基因cDNA全长1806bp,5’非编码区(Untranslatedregion, UTR)长57bp,3UTR长243bp，开放阅读框(Open reading frame, ORF)为1506bp，编码481个氨基酸组成的多肽链，分子量为55.15kDa，理论等电点为5.86。该多肽链由信号肽(20AA)，前体域(83AA)和成熟域(164AA)和C-末端(189AA)四部分组成。前肽结构域中存在着高度保守的氨基酸序列：PRCGVPD。催化结构域中含有一段十分保守的氨基酸序列：HEXXHXXGXXH，其中三个组氨酸与活性中Zn2+形成配位键，对酶的催化起重要作用。C-末端区为血红素结合蛋白结构域，通过铰链区与催化结构域相连，是MMP-3与底物相结合的部位。同源性分析表明，MaMMP3氨基酸序列与其他物种高度保守，相似性介于39-77％之间，一致性介于25-63％之间。进化分析显示，黄喉拟水龟MMP-3与原鸡(Gallus gallus)和珍珠鸡(Taeniopygiaguttata)MMP-3亲缘关系最近。在MaMMP3基因cDNA序列的基础上，扩增得到其基因组DNA序列5708.bp，这个MMP-3序列包括8个外显子和7个内含子，各个内含子的剪切供体或受体处都有“GT/AG”序列特征。组织表达实验表明，MaMMP3在脾脏、肝脏、肾脏、心脏中均表达，脾脏表达量最高。应激实验表明，在黏质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)刺激下，MaMMP3基因脾脏、肝脏中的表达量显著上调。将MaMMP3的开放式阅读框插入pET32a表达载体T7启动子控制下的6-His·Tag编码基因上游，构建原核表达质粒pET32a-MMP3表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导，成功表达pET32a-MMP3融合蛋白。这些结果为探索MMP-3在黄喉拟水龟非特异性免疫反应中的作用提供了重要信息。
筛选得到编码VSIG4全长cDNA(命名为MaVSIG4)。MaVSIG4 cDNA全长1841bp,5’非编码区( Untranslated region, UTR)长332bp,3UTR长327bp，开放阅读框(Openreading frame, ORF)为1182bp，编码372个氨基酸(AA)组成的多肽链，分子量为41.77kDa，理论等电点为8.83。该多肽链由一个信号肽序列(19AA)，两个Ig结构域(109AA和83AA)和一个跨膜结构域(23AA)组成。同源性分析表明，MaVSIG4氨基酸序列与其他物种相比对，相似性介于31-66％之间，一致性介于17-48％之间。进化分析显示，MaVSIG4和原鸡(Gallus gallus)亲缘关系最近。在MaVSIG4基因cDNA序列的基础上，扩增得到其基因组DNA序列7024bp，这个MaVSIG4序列包括6个外显子和5个内含子，各个内含子的剪切供体或受体处都有“GT/AG”序列。组织表达实验表明，MaVSIG4在肝脏、脾脏、心脏和肾脏中均表达，肝脏表达量最高。应激实验表明，在黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)刺激下，MaVSIG4基因在12h肝脏、心脏、肾脏中的表达量显著下降。到24h和36h表达量又开始回复。MaVSIG4的开放式阅读框插入pET32a表达载体T7启动子控制下的6-His·Tag编码基因上游，构建原核表达质粒pET32a-VSIG4表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导，成功表达pET32a-VSIG4融合蛋白。这些结果为探索VSIG4在黄喉拟水龟非特异性免疫反应和特异性免疫反应中的作用提供了重要信息。