秀丽线虫中脂肪代谢基因的筛选验证及调控通路的初步研究

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脂肪代谢是维持机体正常生命活动和生理功能的基本物质与能量代谢的过程,是生命有机体三大基本代谢活动之一。动物体内的储存脂肪主要是中性脂肪,储存在白色脂肪细胞内,存储量取决于合成代谢与分解代谢间的动态平衡。在隐杆秀丽线虫中,脂肪主要以脂滴的形式存在,脂滴可以通过生化染色定量分析,也可以标记脂滴通过成像的手段定性、定量的分析。  本文中,在突变线虫中利用苏丹黑B染色筛选,发现了脂肪含量明显增加的突变体,破碎虫体测定突变体中性脂肪的相对含量也升高,可以初步确定基因T07D10.2参与了脂肪代谢的过程。当外源过表达基因T07D10.2时,发现脂肪含量增加的表型得到恢复。生化染色不能对脂滴进行清晰的观察和数目统计,因此,首先把表达脂锚定融合绿色荧光蛋白的质粒整合到野生型线虫中,得到整合虫系ZXW618,并用LysoTracker Red和Nile Red染色,证明该表达蛋白能够实现对脂滴的标记。然后把筛选到的突变体与整合虫系杂交,得到脂滴被标记的稳定突变体虫系 ZXW619,这为以后共聚焦成像奠定了基础。成像后通过定量统计分析,发现这种突变体的脂滴数目明显增多,而脂滴的大小没有变化。对基因T07D10.2在头部的表达谱做了分析,目前已确定它在ASI中表达。  已经确定基因T07D10.2参与了脂肪代谢的调控,正试图找到神经调控通路。
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