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背景1963年Starzl施行首例临床肝移植手术,但患者因术中出血过多而死亡;1983年美国国立卫生机构正式宣布肝移植是终末期肝脏疾病的有效治疗方法,应予以推广;此后20多年肝移植得以迅猛发展。然而,同其它大器官移植一样,供肝离体后的缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）常导致移植术后原发性移植物无功能（primary graftnonfunction,PNF）,是困扰肝脏移植外科发展的一大重症,被认为是肝移植失败的主要原因;即使是常规的肝叶切除术和严重肝创伤的处理,如需施行肝血流阻断也必使肝脏经历缺血再灌注损伤。因此,如何有效防治肝脏缺血再灌注损伤对于肝胆外科发展具有重要意义,也一直是研究的热点。近年来兴起的缺血预处理与药物预处理展示了强有力的肝脏保护作用,成为两种有前途的防治新方法;相比较而言,药物预处理的安全阈大,无需其它特殊仪器设备,操作简单,更便于临床推广和应用。研究表明,缺血预处理存在双时相性:早期阶段和晚期阶段;由于晚期阶段的延迟性保护作用持续时间长,作用范围广,故更具临床应用价值。因此寻找具有延迟性保护作用的最佳药物对即将经历缺血再灌注的肝脏进行预处理,将成为未来预处理领域的研究热点。腺苷（adenosine）是一种遍布人体细胞的内源性核苷,腺苷受体（adenosine receptor,AR）是一种与G蛋白耦联的糖蛋白,分成4种亚型:A1、A2A、A2B和A3,腺苷主要通过其受体与包括cAMP和Ca2+在内的第二信使相偶联,在细胞的信号传导网络中发挥关键作用。近来越来越多的研究表明:腺苷A2A受体(Adenosine2A receptor,A2AR)是介导缺血预处理和某些药物预处理热缺血再灌注损伤保护作用的最关键受体;目前对A2AR介导的肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究,多局限于肝脏热缺血再灌注损伤和预处理后的早期阶段（预处理后12小时内）。A2AR是否对肝脏移植冷缺血再灌注损伤具有保护作用,且是否对肝脏移植冷缺血再灌注损伤具有晚期延迟性（预处理后24小时-72小时）保护作用还不清楚。目的通过建立大鼠同种异体原位肝移植冷缺血再灌注损伤模型,研究应用A2AR激动剂预处理是否对大鼠移植肝脏冷缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用;并探讨其可能的作用机制,为临床防治肝移植缺血再灌注损伤提供一种新的可能的方法。材料与方法1.动物分组:清洁级健康成年雄性SD大鼠56只,体重200-250g,被随机分为四组,①Sham组:开腹后仅游离肝周韧带;②CGS组:获取供肝24小时前经耳缘静脉注射100μg/kg的选择性A2AR激动动剂CGS21680（总体积1ml）;③CGS+ZM组:获取供肝24小时前供体大鼠在给予上述剂量CGS21680的同时,经耳缘静脉注射100μg/kg的A2AR的特异性抑制剂ZM241385;④缺血再灌注损伤组（I/R组）:获取供肝24小时前经耳缘静脉给予与实验组相同体积和速度的生理盐水。各组供体大鼠都是预处理24小时后开始手术,获取供肝后均置于0-4℃的UW液中冷保存60min,门静脉复流6h后取标本。从预处理到获取标本共经历33h左右（预处理24h后开始手术,肝脏冷保存时间1h,再灌注6h后取标本,供体受体手术时间2h左右）。2.模型的建立:在Kamada的二袖套法大鼠肝移植模型的基础上对其进行适当改良,建立改良的大鼠肝移植模型。3.指标检测:门静脉复流6h后取标本:检测血清ALT和AST评价肝功能;检测血浆细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10等的变化;检测肝脏组织MDA含量和SOD、MPO等酶活性的变化;RT-PCR检测肝脏组织中Bcl-2 mRNA和Caspase-3 mRNA的表达;流式细胞仪检测肝脏组织细胞凋亡坏死情况;组织病理观察肝脏组织细胞损伤程度。结果1.CGS组大鼠肝脏血清ALT、AST明显低于I/R组和CGS+ZM组（P＜0.01）,I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。2.CGS组大鼠血浆细胞因子TNF-a、IL-6的含量较I/R组和CGS+ZM组明显降低（P＜0.01）,而CGS组大鼠血浆细胞因子IL-10的含量明显高于I/R组与CGS+ZM组（P＜0.01）;I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。3.CGS组大鼠肝脏组织SOD的活性明显高于I/R组和CGS+ZM组（P＜0.01）,而CGS组大鼠肝脏组织MPO的活性较I/R组和CGS+ZM组明显降低（P＜0.01）;I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。4.CGS组大鼠肝脏组织MDA的含量明显低于I/R组和CGS+ZM组（P＜0.01）,I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。5.流式细胞仪检测肝脏组织细胞凋亡坏死显示:CGS组大鼠肝脏组织细胞凋亡率/坏死率明显低于I/R组和CGS+ZM组（P＜0.01）,I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。6.RT-PCR结果显示:CGS预处理组肝脏组织中Bcl-2 mRNA的表达较CGS+ZM预处理组和I/R组明显上调,差异有统计学意义（P＜0.01）;CGS+ZM预处理组和I/R组肝脏组织中Caspase-3 mRNA的表达较CGS预处理明显增加,差异有统计学意义,（p＜0.01）。I/R组与CGS+ZM组间差异均无统计学意义。7.HE染色显示:与I/R组及CGS+ZM组相比,CGS组肝小叶结构基本完整,肝细胞及汇管区结构基本正常,仅少数肝细胞轻度水肿和极少点状坏死。8.电镜结果显示:I/R组及CGS+ZM组肝细胞结构完整性破坏,细胞明显水胀,线粒体固缩,微绒毛丧失;而CGS组肝细胞结构完整性尚可,线粒体及内质网轻度肿胀。结论1.腺苷A2AR激动剂预处理对大鼠移植肝脏冷缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用,能减轻移植术后肝脏的缺血再灌注损伤,抑制TNF-α、IL-6等炎性介质的产生,改善肝功能。2.其作用机制可能是通过A2AR激活细胞内的信号转导网络途径,通过抗氧化、抗炎性、抗凋亡坏死等作用对肝移植冷缺血再灌注损伤产生延迟性保护作用。