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人类胚胎来源短缺及研究过程毁坏胚胎引起广范的伦理争议,制约着干细胞研究及再生医学的发展,许多科学家正寻找新的干细胞来源。早期胚胎活检单卵裂球并在体外发育建系可以获取ESC,这种方法不破坏胚胎发育潜力,很大程度降低了伦理争议,本研究通过对小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球发育潜能的研究,为人类单卵裂球体外发育及建系的研究探索条件,建立技术平台。
目的:
研究小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球(4-cell Stage Mice Embryo Derived-blastomeres,4c-MEDB)体外发育的潜能,为人类胚胎单卵裂球体外发育及建系研究提供技术平台。
方法:
将小鼠4-细胞期胚胎用酶消化法或机械分割法分离产生单个卵裂球,在体外无透明带培养条件下,未加任何特殊生长因子,观察其发育潜能及特性,并将得到的囊胚与正常囊胚进行形态学、免疫学比较,最后将4-细胞期胚胎单卵裂球来源囊胚(Individual Blastomere Derived-blastocysts,4c-IBDB)移植到假孕母鼠子宫中,观察其继续发育情况。
结果:
(1).体外无透明带培养条件下,4c-MEDB具有发育成为完整囊胚的潜能,但较正常胚胎发育滞后,囊胚获得率低;(2).4c-IBDB内具有Oct-4阳性表达细胞,但较正常囊胚少;(3).4c-IBDB移植入假孕小鼠子宫后具有一定发育能力,能发育到原条期,但无法获得足月妊娠。
结论:
在未添加任何特殊生长因子的体外无透明带培养条件下,小鼠4-细胞期单卵裂球具有发育为完整囊胚的能力,所获囊胚移植入假孕小鼠子宫后可以发育到原条期。