TCP1(t-complex 1,t-复合多肽)是伴侣素CCT的α亚基,与HL60细胞株恶性程度升高、增殖能力及侵袭能力增强、急性白血病的发生有强相关,随着对miRNAs在肿瘤的发生发展中所扮演角色的认识达到新的高度,miRNAs与肿瘤的研究逐渐被更多学者重视,越来越多的学者们希望借此发现肿瘤新的诊断标准或治疗靶点。课题组前期实验结果表明,TCP1与急性白血病有相关,因此筛选靶向调控TCP1表达的miRNAs可能对急性白血病的诊断及治疗有重要意义。目的:筛选靶向调控TCP1表达的miRNAs。方法:利用分子克隆技术构建并鉴定TCP1的3’UTR双荧光素酶检测载体;借助生物信息学软件正向、反向预测出的多个miRNAs与文献报道过的与肿瘤、PI3K-AKT信号通路相关的miRNAs相结合,选择6个待测miRNAs(hsa-miR-142-5p,hsa-mir-33b-5p,hsa-miR-340-5p,hsa-miR-3143,hsa-miR-543和hsa-miR-429);通过脂质体介导分别将筛选出的miRNAs的模拟物(mimics)与重组质粒共转染入293T细胞,双荧光素酶报告基因检测miRNAs与TCP1的3’UTR区结合情况,同时脂质体介导miRNAs分别转染入293T细胞,检测TCP1表达变化。接着,突变可能与miRNA结合的TCP1 3’UTR上的位点,构建突变重组质粒,并荧光检测突变后共转染细胞内荧光值变化,反向验证靶向调控TCP1蛋白的miRNA。结果:测序结果证实了重组质粒的成功构建;共转染入293T细胞24h后,与对照相比,转染miR-340-5p的实验组荧光值显著下调;转染24h后,TCP1蛋白表达水平明显下调。结论:miR-340-5p为靶向调控TCP1蛋白表达的miRNA。