论文部分内容阅读
目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性滑膜炎为基本病理特征的系统性自身免疫病,可导致关节软骨及骨的破坏。RA患者多伴发骨质疏松,可导致病理性骨折。核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)/骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)系统是骨重建过程中的重要调节因子,在RA骨质破坏中发挥重要作用。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)在RA中通过降解细胞外基质参与软骨破坏。白细胞介素17(interleukin,IL-17)是RANKL/OPG系统以及MMP表达的一个重要调节因子。IL-34在RA发病中发挥重要作用,且对IL-17分泌有促进作用。本实验目的为研究IL-34对RA成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocyte,FLS)以及外周血单个核细胞(Peripheral Blood Monocytic cell,PBMC)表达RANKL/OPG以及MMP-3的影响,以及此作用是否通过调控IL-17而实现。方法用不同浓度rh IL-34(0,10,20,50,100ng/m L)处理RA-FLS以及RA-PBMC,同时加入或不加IL-17抑制剂(Plumbagin)。RA-FLS用r IL-34刺激,同时加入IL-17抑制剂(4nmol/m L)或等体积PBS,刺激48小时后,提取培养基,离心后取上清,酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测RANKL,OPG以及MMP-3的分泌水平。RA-PBMC用r IL-34以及CD3/CD28抗体刺激,同时加入IL-17抑制剂(5nmol/m L)或等体积PBS,刺激72小时后,提取培养基,离心后取上清,ELISA法检测培养基上清中的RANK/OPG以及MMP-3的分泌水平。结果rh IL-34刺激RA-FLS分泌RANKL;加入Plumbagin(4nmol/m L)后,RA-FLS细胞分泌RANKL水平明显下降(p<0.01)。rh IL-34抑制RA-FLS分泌OPG;加入IL-17抑制剂(4nmol/m L)后,RA-FLS细胞分泌的OPG水平明显升高(p<0.01)。r IL-34对RA-FLS细胞分泌MMP3无明显作用。rh IL-34刺激RA-PBMC分泌RANKL;rh IL-34对健康对照者PBMC分泌RANKL无影响(p<0.01)。Plumbagin(5nmol/m L)可抑制RA-PBMC分泌的RANKL水平(p<0.01)。rh IL-34抑制RA-PBMC及健康对照者PBMC分泌OPG(p<0.01)。Plumbagin(5nmol/m L)可提高RA-PBMC分泌的OPG水平(p<0.01)。rh IL-34对RA-PBMC及健康对照者PBMC分泌MMP-3均无影响。结论IL-34可能通过调控IL-17来影响RA-FLS以及RA-PBMC的RANKL/OPG表达,从而在RA骨质破坏以及骨质疏松中发挥作用,并且可能由IL-17介导。IL-34可能是骨重建的一个重要标记物以及治疗RA骨破坏的一个潜在治疗靶点。MMP-3的调控机制尚不明确,需要进一步研究。在RA中,活化T细胞以及成骨细胞表达的膜结合RANKL以及活化T细胞和FLS表达的s RANKL均在破骨细胞性骨重吸收中发挥作用。此研究主要针对s RANKL,而膜结合RANKL(m RANKL)也在破骨细胞生成中发挥重要作用,所以m RANKL在RA中的作用尚需进一步研究。