目的:肾小管间质纤维化（Tubulointerstitial fibrosis,TIF）不仅是慢性肾脏病最主要的病理表现,也是造成慢性肾脏病持续性进展的重要原因。研究表明,在急性肾损伤后修复过程中,增殖的小管上皮细胞可能出现细胞周期阻滞,停留在G2/M期,进而产生大量的促纤维化因子如TGF-β和CTGF等,促进间质成纤维细胞活化并最终造成小管间质纤维化。目前对于造成小管细胞G2/M期阻滞的机制尚不清楚。以往研究表明m TORC1激活可促进肾小管间质纤维化的进展,然而m TORC1信号通路对小管细胞细胞周期调控及其与肾小管间质纤维化的关系并不明确。本研究重点研究m TORC1下游的4E-BP1和S6K1信号通路在调控小管细胞周期及其在肾脏纤维化中的作用。方法:体外实验:选用大鼠小管上皮细胞系（NRK-52E）,分别利用4E-BP1四个磷酸化位点突变（T37A/T46A/T70A/S65A）的质粒（4E-BP1A4）转染和S6K1抑制剂PF-4708671来干预4E-BP1和S6K1,观察其对小管细胞增殖、细胞周期和促纤维化因子表达的影响。体内实验:选用18-20g,雄性CD-1或C57BL/6小鼠,建立单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）模型,分别在手术后3天、7天、14天处死小鼠,留取肾脏标本。通过Masson和PAS染色观察肾组织纤维化情况,并利用免疫组化、免疫荧光、免疫印迹、q PCR等方法来研究4E-BP1和S6K1与小管细胞周期的关系。结果:在培养的大鼠肾小管上皮细胞系（NRK-52E）中,5%新生牛血清（NCS）刺激15分钟后p-S6的含量增加,在1 h达到峰值,随后逐渐降低于24 h恢复到接近刺激前水平;p-4E-BP1和p-H3在血清刺激后水平逐渐增加,于24 h达到峰值。我们利用4E-BP1突变体（4E-BP1A4）质粒转染NRK-52E细胞,发现转染该突变体可以降低细胞增殖能力,而用PF-4708671抑制S6K1对NRK-52E细胞增殖无明显影响。用流式细胞术分析细胞周期变化发现转染4E-BP1突变体后,处于G2/M期的细胞数显著减少,G2/M期的调控蛋白Cyclin B1及有丝分裂标志蛋白p-H3含量也明显减少,小管细胞促纤维化因子和细胞外基质的表达也显著降低。以往研究证实马兜铃酸（aristolochic acid,AA）可通过诱导小管上皮细胞G2/M期阻滞,促进小管细胞促纤维化因子CTGF,TGF-β和细胞外基质的表达,进而造成小管间质纤维化。本研究中,我们利用AA处理NRK-52E细胞,发现p-4E-BP1的含量显著增加,Cyclin B1及p-H3的含量也明显升高,促纤维化因子和细胞外基质的表达也大量提高。转染4E-BP1突变体后,升高的Cyclin B1,p-H3,促纤维化因子和细胞外基质明显受到抑制。我们进一步在小鼠UUO肾脏纤维化模型中验证p-4E-BP1和小管细胞周期的关系。结果发现UUO术后3天时p-4E-BP1,Cyclin B1和p-H3蛋白水平开始增加,14天时增加更为明显。组织学染色发现术后14天时大量小管细胞处于有丝分裂期,p-4E-BP1在该期细胞中的含量尤为明显。结论:肾脏损伤后,受损的小管细胞中p-4E-BP1的含量增加,促使Cylin B1和p-H3的含量增加,使处于G2/M期的小管细胞增加,促进小管间质纤维化的发展。靶向4E-BP1可能成为拮抗肾小管间质纤维化的有效选择之一。