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(一)重组人白细胞介素10基因的克隆及其在CHO细胞中的表达目的:克隆编码人白细胞介素10(human interleukin 10,hIL10)基因的全长cDNA,在CHO细胞中获得高表达。方法:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出hIL10cDNA,将测序正确的hIL10cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3构建重组表达载体。采用磷酸钙法转染CHO细胞,用ELISA法检测hIL10蛋白的表达量,用MTT法检测hIL10蛋白的活性。结果:RT-PCR产物插入Teasy载体,经序列测定证实hIL10基因全序列克隆成功。在CHO细胞培养上清中有hIL10的表达,该产物能抑制淋巴细胞转化。结论:hIL10基因的获得及在真核细胞中的表达,为进一步研究IL10基因治疗在自身免疫、移植免疫及炎症性疾病中的作用提供了基础。关键词:人白细胞介素10; 克隆 ; CHO细胞; 基因表达(二)人白细胞介素10基因给药对NOD鼠糖尿病的预防作用目的:探讨hIL10基因治疗对非肥胖糖尿病(nonobese diabetes ,NOD)鼠1型糖尿病发病率、胰岛炎的影响。方法:4周龄雌性NOD小鼠尾静脉快速注射hIL10表达质粒,对照组注射等量无质粒Ringer’s液。ELISA检测小鼠血清中hIL10的表达,10周龄后每周测定血糖,25周龄时观察1型糖尿病的发病率,取未发病的NOD鼠的胰腺组织行HE染色观察胰岛炎程度。结果:处理组hIL10蛋白表达始于注射后8小时,持续14天左右。处理组糖尿病发病率为25.00%,明显低于对照组(71.43%)(P<0.05) ,且处理组中未发病的NOD鼠胰岛炎的严重程度亦低于对照组。结论:hIL10基因给药可以减轻NOD鼠胰岛炎严重程度,降低1型糖尿病发病率。