体外筛选与顺铂特异性结合的核酸序列以及新型铜配合物的核酸活性研究

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顺铂作为目前国际上使用最广泛的一类抗癌药物,其作用机理一直以来都得到许多科学工作者的重视。在细胞内的物种中,目前普遍认为DNA是顺铂作用的主要靶向分子。顺铂和DNA发生作用时,主要产生链内和链间交联产物。前人发现,顺铂与DNA同一条链上的GG、AG、GNG位点配位结合从而导致DNA链产生扭曲。这样的交联作用使得DNA复制转录失败,最终导致癌细胞的凋亡。文献中有关顺铂与DNA的序列选择性研究都有非常大的随意性,序列的选择是人为设定的。我们尝试着采用SELEX技术(一种近年来兴起的体外筛选核酸技术),并以顺铂及其类似物作为靶分子,从含有随机位点的寡聚核苷酸库中筛选出与顺铂有选择性结合的DNA序列,希望对顺铂药理上的研究和应用能有所拓展。现在已经完成的有文献搜集、SELEX草案的设计、随机序列的设计以及筛选实验所涉及的各种生化实验手段掌握,并对筛选实验进行了初探。以上是我研究生期间工作内容之一。 DNA在生理条件(37℃,PH=7.4缓冲溶液)下是相当稳定的,其磷酸二酯键水解的半衰期达百万年以上。因此对于基因工程来说,找到能够催化DNA断裂的核酸切割酶或磷酸二酯键水解酶是非常有应用价值的。虽然DNA对于水解作用是稳定的,但却很容易通过氧化或是自由基的反应而导致链的断裂。利用这一点,从事生物无机研究的科研工作者化学合成一些配合物,这些配合物在氧化剂或还原剂的存在下具有催化DNA链断裂的性质,D.Sigman将其称为化学核酸酶(chemical nuclease)。在化学核酸酶中,犹以铜的配合物较多。以此为目的,本实验室合成了一系列新型铜配合物,用琼脂糖凝胶电泳的手段研究了这些铜配合物切割质粒DNA的活性,这是我研究生期间的另一部分工作。通过以上研究发现了多个具有核酸活性的铜的配合物体系。
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